生物技术 世界生物医药齐墩果酸药理作用研究李雅玲 冯威 陈航宇 郑晓娟 魏振奇 吴启坤 郗艳丽*1(吉林医药学院公共卫生学院 吉林吉林 132013)摘要:齐墩果酸具有多种药理作用,并已经应用于临床。本文综述了近些年来齐墩果酸的药理作用和其相关的作用机制的研究进展,并对其研究前景进行展望。关键词:齐墩果酸 药理作用 作用机制中图分类号:R96文献标识码:A文章编号:1674-2060(2015)04-0125-02齐墩果酸(oleanolic acid,OA)是以游离和(或)与糖结合的形式广泛存在于食物、医学草本植物和其他植物中的一种五环三萜类化合物,如在青叶胆全草、白花蛇舌草、女贞果实等植物中就含有丰富的齐墩果酸。齐墩果酸的药理作用广泛,现针对近年来齐墩果酸的药理作用研究作如下综述。1 护肝作用齐墩果酸保肝、护肝作用的研究比较早,在20世纪70年代就已见相关的报道。目前,齐墩果酸已经应用于急慢性肝炎的辅助治疗。齐墩果酸能抵抗多种化学毒物引起的急慢性肝损伤,减轻肝细胞的脂肪变性和纤维化,促进肝细胞再生。如小鼠经齐墩果酸预处理后,肝脏受乙酞氨基苯酚的损害明显减少。齐墩果酸通过抑制CCl4诱导肝硬化大鼠血浆谷丙转氨酶活性,降低脑匀浆谷氨酸水平,使肝细胞变性坏死减少,肝组织炎症反应减弱。除此之外,人们对齐墩果酸的干预时间也做了观察和研究,发现齐墩果酸提前12h预处理有明显的保肝作用,提前24～48h预处理的效果最佳,其机制可能与齐墩果酸预处理后抑制CCl4引起的谷胱甘肽耗竭及P4502E1水平的降低有关。齐墩果酸的药理作用与剂量也有关系,低剂量的齐墩果酸能保护肝脏,而高剂量使用时能够导致胆汁郁积和肝毒性,其机制有待进一步的研究。2 抗癌、抗突变作用齐墩果酸对人早幼粒白血病细胞HL-60有抑制作用。形态学观察发现齐墩果酸作用后的HL-60细胞出现了凋亡现象,细胞增殖受到抑制。基因表达水平检测发现80μM齐墩果酸作用HL-60细胞48h,能明显降低PI3K、Akt和Cav-1mRNA的水平,提示PI3K/AKT信号通路参与了齐墩果酸诱导HL-60细胞凋亡的作用过程,从而抑制肿瘤细胞增殖。齐墩果酸能抑制人高转移巨细胞肺癌PGCL3细胞的转移,对黑素瘤细胞的增殖也有明显的抑制作用。此外,在药理研究中还发现齐墩果酸可作用于肿瘤的不同阶段,抑制肿瘤的诱发、形成和分化。3 降脂、降糖作用齐墩果酸能降低高血脂大鼠血清甘油三酯和胆固醇的含量,减少脂质在器官中的沉积,但对正常大鼠的血脂无影响。通过降低过氧化脂质的含量来保护PGI2合成酶,同时抑制TXA2的生成,使PGI2/TXA2比值升高,从而抑制平滑肌细胞增生和减少泡沫细胞形成,阻碍动脉粥样硬化的形成。糖尿病是一种以过高血糖浓度为主要表现的常见代谢性疾病,基金项目:吉林省大学生创新创业训练计划项目。通讯作者:郗艳丽,博士,讲师,研究方向为食品毒理学。目前尚没有较有效的治愈方法。齐墩果酸能通过抑制α-糖苷酶的活性降低血糖,对四氧嘧啶诱导的大鼠高血糖也有抑制作用,这一新功能的发现使齐墩果酸成为治疗糖尿病的新药物。4 抗胃溃疡作用齐墩果酸对醋酸引起的胃溃疡有治疗作用。齐墩果酸给药剂量从50mg/kg增长到100mg/kg时,胃损伤治疗比率从54.5%增加到76%,黏膜厚度从342μm增加到540μm,胃组织病理学检查结果显示损害区域开始再生,受损区明显减少,胃溃疡被修复。此外,齐墩果酸对MRC-5成纤维细胞的增殖也有刺激作用,纤维细胞的大量增殖有利于受损区域的修复。5 抗炎和调节免疫作用不仅抑制组胺、花生四烯酸酯氧酶(LTB4)等炎症因子的合成和释放,还可阻止白细胞在体内的游走及肉芽组织增生,降低体内补体活性,抑制炎症的发生发展。齐墩果酸的抗炎机理可能与垂体一肾上腺皮质系统有关。齐墩果酸通过促进前列腺素合成和环腺苷酸水平上升,抑制环鸟苷酸和组胺释放,抑制免疫作用。齐墩果酸能抑制二甲苯与乙酸引起的小鼠皮肤和腹腔毛细血管通透性增高。虽然齐墩果酸对四种类型的变态反应都有抑制作用,但是齐墩果酸不能阻止免疫复合物所致的组织损伤。6 抗过氧化、抗衰老作用衰老是人们不可避免的问题,而齐墩果酸有延缓衰老的作用。齐墩果酸有提高抗氧化酶的活性,清除体内自由基和抑制脂质过氧化物丙二醛生成,增加机体内脂质稳定性。7 抗高血压作用齐墩果酸能抑制远曲小管近端对Na+和K+的重吸收而产生利尿作用,降低血压。此外,齐墩果酸还有强心作用,可使心率减慢,进而降低血压。8 抗血小板聚集作用30周龄小白鼠经齐墩果酸作用后,血小板电泳迁移速率明显增加。由于血小板的流动性增加,减少了血小板之间的碰撞,抑制了血小板的粘连和聚集,减少了血小板在血管内膜上的沉积,缓解了血栓形成。齐墩果酸不仅具有保肝、增强免疫、抗肿瘤、降糖降脂、抗氧化和利尿等多方面的药理作用,还具有毒副作用小,安全性高等特点。······下转第127页BIOTECHWORLD 生物技术世界125生物医药生物技术 世界注射级羟丙基-β-环糊精生产过程细菌内毒素的控制于秀芹 郭军臣(石药集团 河北石家庄 052160)摘要:本文通过分析羟丙基-β-环糊精生产过程中物料、设备、环境和过程控制等几个方面,确定了影响产品质量中内毒素指标的关键因素,即纳滤机、阳离子树脂、滤芯的清洗及物料半密闭状态下存放。关键词:羟丙基-β-环糊精 内毒素 控制中图分类号:R615文献标识码:A文章编号:1674-2060(2015)04-0126-02细菌内毒素(bacterial endotoxin),又称热原(pyrogen),是革兰阴性细菌细胞壁中的一种脂多糖。它是严重威胁人类健康的致病因子,很小的剂量即能引起极广泛的生物及病理作用。注射剂的细菌内毒素含量达1μg／kg就可引起不良反应,如发热反应,有时体温可升至40℃以上,严重者甚至昏迷、虚脱,如不及时抢救,可危及生命[1]。目前在注射剂生产中,去除细菌内毒素常采用活性炭吸附法。注射剂生产中一般加入药液体积的0.03%～0.50％活性炭来除去细菌内毒素,但若其料液的细菌内毒素过高将难以保证活性炭去除热原后注射剂中热原含量在安全范围内[2]。根据某注射液的临床试验,要求包合辅料注射级羟丙基-β-环糊精质量控制细菌内毒素≤0.05EU/mg。作为该注射液辅料的供货单位,如何控制注射级羟丙基-β-环糊精生产过程的产品细菌内毒素是我们一个重要课题。1 注射级羟丙基-β-环糊精生产过程1.1 生产工艺羟丙基-β-环糊精生产过程为:首先在碱性溶液中加入β-环糊精溶解,并于室温下滴加环氧丙烷反应;其次用盐酸中和碱性反应液,用纳滤去除中和过程中生成的氯化钠,再用阴、阳离子树脂柱去除微量的氯化钠和残留的β-环糊精;然后用纳滤浓缩料液,通过滤芯过滤,进入冷冻干燥机进行干燥;最后进行磨粉、混粉、分装。在整个生产过程中,反应、中和、除盐、除β-环糊精残留、浓缩等过程在一般生产区进行,过滤、冷冻干燥、磨粉、混粉、分装在洁净室D级区完成。整个产品生产周期为三天。基-β-环糊精生产工艺为在碱性溶液中加入β-环糊精溶解,室温下滴加环氧丙烷反应。反应液的液碱浓度在12%左右,反应时间在3h以上。而生产验证表明,原料在5%以上的液碱溶液中浸泡40min以上,即可有效去除其中的细菌内毒素。因此,由β-环糊精、环氧丙烷、氢氧化钠引入产品细菌内毒素的可能性极小。盐酸中和碱性反应液时,所用盐酸浓度为32%左右,为强酸,也可有效去除细菌内毒素。因此盐酸引入产品细菌内毒素的可能性也极小。为了验证以上分析的正确性,参考相关文献[3],用鲎试剂检测法,对9个批次的中和后反应液进行检测,其细菌内毒素均小于0.05EU/mg。因此,β-环糊精、环氧丙烷、氢氧化钠、盐酸不是产品细菌内毒素的影响因素。生产用水为纯化水,中国2010版药典没有规定纯化水细菌内毒素的质量标准,欧洲药典第6版规定纯化水细菌内毒素的质量标准为≤0.25EU/ml。通过连续9个批次检测,纯化水细菌内毒素均小于0.05EU/mg。因此,纯化水不是产品细菌内毒素的影响因素。2.2 设备羟丙基-β-环糊精生产过程中,在不锈钢反应罐中进行氢氧化钠溶解、β-环糊精溶解、环氧丙烷滴加反应以及盐酸中和等反应。反应液的液碱浓度在12%左右,反应时间在3h以上,可以有效去除细菌内毒素。因此,反应罐引入产品细菌内毒素的可能极小。反应结束后反应罐用纯化水清洗后干燥,放置1天,用纯化水淋洗取样检测细菌内毒素小于0.05EU/mg;放置2天,用纯化水淋洗取样检测细菌内毒素仍然小于0.05EU/mg;放置3天,用纯化水淋洗取样检测细菌内毒素大于0.05EU/mg,但小于0.1EU/mg。生产中使用纳滤机进行除盐、浓缩,所用纳滤机为卷式膜过滤器。羟丙基-β-环糊精属于糖类,若纳滤机清洗不彻底,残留的羟丙基-β-环糊精极易滋生微生物,造成卷式膜内残留液体细菌内毒素偏高,从而影响产品细菌内毒素指标,为关键影响因素。按照设备厂家提供方法进行纳滤机清洗,通量达到要求后,取样检测细菌内毒素大于0.05EU/mg,但小于0.1EU/mg。开启高压泵继续清洗至取样检测细菌内毒素小于0.05EU/mg;设备放置1天,取样检测细菌内毒素小于0.05EU/mg;设备放置2天,取样检测细菌内毒素大于0.05EU/mg,但小于0.1EU/mg。设备放置3天,取样检测细菌内毒素大于0.1EU/mg。阴、阳离子树脂柱为玻璃柱,离子树脂可去除料液中的细菌内毒素,应该不是产品细菌内毒素的影响因素。用5%的碱液泡洗再生的阴离子树脂和5%的盐酸泡洗再生的阳离子树脂放置1天的溶液,1.2 物料生产用β-环糊精、环氧丙烷、氢氧化钠、盐酸为工业级,生产用水为纯化水。1.3 设备生产过程中用到的主要设备包括:不锈钢反应罐,纳滤机,阴、阳离子树脂柱,聚丙烯滤芯,316L不锈钢的冷冻干燥机、磨粉机、混粉机。2 影响产品细菌内毒素的因素分析及检测确认为了找出羟丙基-β-环糊精生产过程影响产品细菌内毒素的因素,我们分别从物料、设备、环境、过程控制入手,分析并检测确定影响产品细菌内毒素的关键因素。2.1 物料生产用β-环糊精、环氧丙烷、氢氧化钠、盐酸为工业级。羟丙126生物技术世界 BIOTECHWORLD