第一章 规章制度
第一节 临床输血管理委员会
一、临床输血管理委员会组成 二、临床输血管理委员会工作职责 三、临床输血管理委员会工作计划
第二节 临床用血申请与审批管理
一、临床用血计划的拟定 二、临床用血申请和审批制度 三、临床退血管理
第三节 临床输血操作步骤及岗位职责
一、临床输血操作步骤 二、各岗位职责流程图
第四节 输血科管理制度
一、科室工作守则
二、临床用血有控制感染的方案及管理制度
三、输血反应及输血感染疾病的登记报告与调查处理制度 四、消毒隔离及污物处理制度 五、工作人员健康体检制度 六、考勤制度 七、请假制度 八、人事考核制度 九、奖惩制度
十、计算机使用管理制度 十一、仪器设备管理制度 十二、值班工作制度
十三、临床用血计划申报登记制度 十四、配输血查对制度
十五、血型鉴定与交叉配血的复查与核对制度
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十六、血液储存、发放、临床输血和血液报废制度 十七、血液质量监测制度
十八、仪器设备认购、验收、使用管理、保养、维修及报废制度 十九、试剂的认购与入库、领用制度 二十、计量管理制度
二十一、差错事故登记、报告制度 二十二、方便病人配合临床制度 二十三、科学合理用血制度 二十四、紧急用血制度 二十五、输血治疗知情同意制度 二十六、各种登记记录管理和保存制度 二十七、库房管理制度 二十八、档案保管制度
二十九、输血不良反应处理和回报制度 三十、交接班制度
三十一、血液标本的留取接收保存制度 三十二、实验室管理制度
第五节、岗位职责
一、输血科主任岗位职责 二、主任、副主任技师岗位职责 三、主管技师职责 四、输血科技师岗位职责 五、输血科技士岗位职责 六、临床医师在用血时的职责 七、临床护士在用血时的职责
第二章 仪器、设备使用操作规程一、低温冰箱使用及注意事项 二、离心机使用及注意事项 三、储血冰箱使用及注意事项
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四、恒温水浴箱使用及注意事项 五、贮存试剂冰箱使用及注意事项 六、热合机使用操作规程 七、净化操作台使用规程 八、血浆融化仪使用操作规程 九、血小板振荡保存箱使用操作规程 十、电烤箱使用操作规程
第三章 血液入库检查规程
一、血液入库储存发放规程 二、血液质量检查规程
第四章 输血相容性检测作业指导书
第一节 样本管理类作业指导书 第二节 试验方法类作业指导书
一、ABO及RhD血型鉴定试验标准操作规程 二、不规则抗体筛查标准操作规程 三、交叉配血标准操作规程
四、手工抗人球蛋白试验(试管法）标准操作规程 五、Rh血型分型(试管法）试验标准操作规程 六、ABO及Rh血型抗体效价测定试验标准操作规程 七、新生儿溶血病血清学检查标准操作规程 八、吸收-放散试验标准操作规程
九、RhD血型确证试验（卡式抗人球法）标准操作规程 十、ABH唾液型物质凝集抑制试验标准
第五章 全自动血型配血系统作业指导书
第一章 规章制度
第一节 临床输血管理委员会
一、临床输血管理委员会组成
卫生部颁布的《医疗机构临床用血管理办法》及《临床输血技术规范》文件要求医疗机构应该由主管院领导、业务主管部门及相应科室负责人员组成医院临
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床输血管理委员会，其主要职责是负责临床用血的规范管理和技术指导，开展临床合理、科学用血.其基本组成为:主任委员由主管院长担任；副主任委员由医务处处长和输血科主任担任;委员有外科相关科室主任、内科相关科室主任、妇产科主任、麻醉科主任、检验科主任、急诊科主任、小儿科主任、护理部主任、感染科主任等，同时在输血科设立办公室。
二、临床输血管理委员会工作职责
1.按照卫生行政部门要求，宣传贯彻执行中华人民共和国《献血法》、卫生部《临床输血技术规范》，完善与规范医院临床输血的管理。
2.制定专业技术人员培训计划，采取多种形式,进行院内输血医学知识继续教育，提高医院临床医护人员输血知识和管理水平。
3.根据卫生部《临床输血技术规范》及地方血液管理规定，制定本院临床输血过程的标准程序并培训所有人执行。
4。协调输血科与临床科室输血工作事宜。 5。监督指导临床医师安全、科学、合理用血。 6.积极推广临床输血新技术、新材料、新业务。 7。积极参与医院临床抢救患者的输血指导与协调工作。
8。组织专家鉴定因输血而导致的医疗纠纷（溶血反应、输血相关传染病及差错事故等），并向医院提交总结性报告和结论。
三、临床输血管理委员会工作计划
1.每年进行1~2次全院医护人员临床输血知识与血液管理培训。 2.对引入医院输血新技术的开展进行论证评估。 3.每年完善本院临床输血技术标准程序。
4.对医院输血管理与技术问题，随时进行监督和管理. 5.开展全院范围内临床输血科研工作协作与交流. 6。指导输血医学的对外交流及输血医学的教学工作。
7.每年进行一次医院临床输血管理委员会会议,汇报本年度工作执行情况、制定下一年工作计划，提出临床输血合理化建议.
第二节 临床用血申请与审批管理
为严格临床输血管理，保护血液资源，使临床科学合理、安全有效使用血液，
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更好地为患者服务，特制定临床用血计划的拟定、临床用血申请与审批制度。
一、临床用血计划的拟定 1。临床用血计划包括月、年计划。
2.临床用血计划拟定的依据：上年（月）度同期用血水平、病床数、季节以及医疗水平的发展等因素综合考虑。
3.拟定用血计划的优点：采供血机构合理安排采供血和血液储存，医疗机构有充足的血液供应
4.计划的提交：年计划应在上年底交给血站,月计划在上月底交给血站，血站根据各医疗机构的计划合理安排采供血。
5。计划的合理性：医院用血量越大，计划越好做,也越合理.因为正常红细胞有一定的储存期限，在向血站预约血液时可以要求供应不同采血日期的血液,方便储存。
6。特殊用血管理：正常情况下红细胞和血浆是不应该有急诊的，其它特殊血液尽量提前预约，双方电话、网络等都可以及时联系，最好有记录，防止预约差错引起不必要的纠纷。 二、临床用血申请和审批制度
1。择期手术患者用血应在手术前一天将血样及输血申请单送到输血科。 2.择期手术用血量预计大于2000ml者，提前2天送血样到输血科，输血申请单报送医务处审批后送输血科。
3.急诊用血可随时送血样与申请单到输血科。
4。对Rh（D)阴性患者或其他稀有血型及小量用血者（≤100ml），如机采血小板、粒细胞、冷沉淀制剂等，输血科接到申请后应尽快与中心血站联系，并随时把结果电话通知临床科室。
5。因术前未备血（急诊除外）造成术中输血延误或供应不及时，如：稀有血型等，而造成的后果,责任由临床科室负责。
6.门诊患者输血，同样须履行有关输血程序（输血知情同意书、临床科室或输液间采血样、门诊缴费、输血前四项检测、门诊病历记录等），严禁将血液带到医院外输注（与医院有协议的单位除外）,临床科室严禁输注患者自带血液。
7。对于无助或无主患者输血，按照医院有关制度执行，原则是优先抢救患者生命。
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8.当临床和实验室指征表明需要输血时,根据紧急需要血液、肯定需要血液及可能需要血液等情况采取不同的申请程序。
图 血液申请程序指南
三、临床退血管理
1。根据国家卫生部《临床输血技术规范》要求，凡血液成分离开输血科后，概不退回。
2。输血科发出的血液若有质量问题（如:溶血、凝块、乳糜血等）,经输血科认定后负责收回。
3.血液发到临床科室后应尽快输注（如:血小板就立即输注)，以保证血液输注疗效。
4。血液发出后，临床科室由于各方面原因不能及时输注时，应及时和输血科联系（半小时内),可将血液储存于输血科专用冰箱,若血液随后输注须经输血科确认质量合格后方可使用，血液不能存放于临床科室普通冰箱内。
5.因病人原因（如发烧、突然死亡等），血液发出未输或配好未取，输血科应立即将血液放置专用冰箱视情况处理.
第三节 临床输血操作步骤及岗位职责
一、临床输血操作步骤
临床输血过程的具体步骤是从患者病情决定需要输血起，到血液输注完成且达到了临床输注的疗效止。见表
表 临床输血过程的具体步骤
1.评估患者的用血需要以及要求输血的时间
2。告知患者和（或)其亲属拟实施的输血治疗的利与弊、输血风险，使其知情同意并签字，记录于病历中。
3.在患者病历中记录输血的指征及需要的血液制品和数量。
4。准确和清楚地填写输血申请单及输血前受血者传染病指标化验申请单，注明输血的原因。 5。如果紧急需要血液，立即通过电话和输血科(血库）联系. 6.采集并正确标识用于配血试验的血样及检验用血样. 7。将用血申请单及血样送到输血科(血库)
8.实验室进行输血前血型鉴定、抗体筛查及交叉配血试验，选择配合的血液 9.临术医护人员到输血科（血库)领取血液制品
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10.发血时及输血前核对以下各项的一致性 （1）患者信息； （2）血液制品质量；
(3）供受者血型及配合性试验结果。 11。输注血液 12.在患者病历上记录
（1）输注的所有制品的种类和容量； (2）输注的所有制品的唯一性献血编号； (3）输注的所有制品的血型； (4）每袋制品开始输注的时间； （5）输血执行者.
13。在输血之前、之中和之后观察、监护患者 14。记录输血完成时间
15.识别输血反应,一旦发生,立即采取措施.在患者病历上记录输血反应情况并填写输血反应回报单。
二、各岗位职责流程图
图 蚌埠医学院第一附属医院临床输血流程图
第四节 输血科管理制度
一、科室工作守则
为严格纪律，维护正常工作秩序，增强科室全体人员的主人翁责任感,充分调动工作人员的积极性和创造性，特制定科室工作制度如下：
1. 要自觉遵守本科的纪律和一切规章制度，党团员必须以身作则做遵守纪律的模范。
2. 凡是违反纪律和规章制度者都要按奖惩条例，进行严肃处理,凡是模范维护纪律及规章制度者都要按奖惩条例给予表扬和奖励。
3。 必须认真执行请假、考勤制度，不无故缺席，不得旷工.并做到三不:不迟到早退，不做私事私活,不擅离工作岗位。
4。 必须服从组织调动与工作分配,如认为调动分配不当，可向领导反应，但组织未做出更改前必须认真执行。工作时间不得玩忽职守，不得借故闲谈游荡，
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影响他人工作。
5。 要廉洁奉公,公私分明,严禁贪污受贿、假公济私、挪用国家物资、损坏公物要赔偿。必须讲文明、讲礼貌，要遵纪守法，维护治安，做到不打人、不骂人，不与病员及家属争吵,接待态度热情.
二、临床用血有控制感染的方案及管理制度
1。 医院输血管理委员会要加强对临床输血工作的监督和管理，临床输血要严格执行用血登记制度和用血报批手续,输血科不得发出未标有供血者血编号、血型、血液品种、采血日期、有效期、采供血机构名称及许可证号的血液。
2。 必须严格执行输血前的检验和核对制度,临床出现不良反应或输血相关疾病时,应详细记录积极调查处理，并及时报告。
3。 临床医生必须严格掌握输血的适应症，在决定是否输血时应考虑到输血的危险性，权衡利弊，必须做到：能不输血的尽量不要输血,可不输全血的尽量不输全血,可不输新鲜血的尽量不输新鲜血,大力开展成份输血.
4。 在临床操作中，不能随意打开血包以避免污染,切忌把任何药物直接加入血液内一同输注。
5。 操作人员严格执行无菌操作手续，所用输血器材必须为一次性使用的经全方位进行监督和检查的合格产品.
6。 定期进行室内空气培养及消毒，并由院内感染管理科实行监督,对细菌含量超标科室加强消毒管理,否则禁止进行输血操作，造成不良影响者追究当事者责任.
三、输血反应及输血感染疾病的登记报告与调查处理制度
临床出现输血反应或输血感染疾病后必须对其过程进行详细的登记、报告并调查处理。
1. 对输血反应者，应立即停止输注，迅速给患者做出相应处理，收集余血血袋及所用输血器材备查，并立即通知输血科。
2. 病房或输血科应及时报告医务科及分管院长，市中心血站及相关单位. 3. 正确进行调查取证:首先由输血科人员对血型及交叉配血进行复检，如血型及交叉配血均没有问题，则应检查输血器材，操作人员及患者自身的情况，复检结果报告医务科，并由医院按有关文件规定进行处理。
4. 对输血感染性疾病，应详细登记病人的发病情况、症状及输血前后的各
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项指标检查结果，并立即上报医务科,院内感染管理科，分管院长，市中心血站，卫生局，并对室内空气及所用同批号输血器材进行培养看是否同型细菌;其次是由中心血站配合进行，由血站调出供血者档案后，对供血者进行复检，综合分析后查出责任者，对所涉及人员的处理方案按有关规定执行。
5。 将调查的有关详细资料登记，并报有关部门。 四、消毒隔离及污物处理制度
1。 工作人员每日上午上班时，首先将配血后一周以上不再需要继续保留的病人及献血员标本用1:20的二氧化氯消毒液浸泡半小时，然后将其送清洗室,煮沸、清洗后高压消毒。
2. 每日上午湿式清扫各室卫生,并用1:40的二氧化氯消毒液擦拭各室台面、椅、凳、冰箱、水浴箱、离心机、显微镜及门窗等。并用1：40的二氧化氯消毒液拖地.
3. 每日各室紫外线灯照射消毒30~60分钟（灯亮5～7分钟后计时）,并有登记签名。
4. 输血科工作人员上班时,应穿工作衣、戴帽子及口罩，1：40的二氧化氯消毒液浸泡手5分钟，再用肥皂、流水冲洗。（肥皂悬吊使用)。
5。 输血科上班时间，除取血医护人员可以进入取血室外，闲杂人员严禁进入输血科.
6。 血型定型、配血用过的试管、玻片、吸管、注射器、标本等应放入盛有1：20的二氧化氯消毒液的废物缸内浸半小时以上，然后送清洗室作煮沸、清洗、高压消毒处理。对一次性用品应送焚烧炉焚烧处理,专人负责并有登记。
7. 工作完毕后，用1：40的二氧化氯消毒液浸泡手5分钟，再用肥皂，流水冲洗。
8。 每月用紫外线强度检测卡测定一次紫外线灯管强度，新管强度应大于100uw/cm2，旧管强度大于70uw/cm2为合格。总使用累计时数不超过1000小时,紫外线灯管，每两周用无水酒精纱布擦拭，随污随擦。
9。 定期进行空气微生物监测,细菌数应控制在200cfu/cm3以内，保留资料备查，并有登记签名。
五、工作人员健康体检制度
为防止因输血科工作人员健康问题而影响临床输血质量的情况,保障患者输
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血安全，特制定输血科工作人员健康体检制度。
1。 输血科工作人员每年体检一次，项目包括：肝功能、HBsAg、抗—HCV、TRUST、抗—HIV。
2. 对检查结果阳性的工作人员立即停止输血科工作、休息、治疗，连续复查三次阴性者方予以上班，长期不合格者调离输血科岗位.
3。 对新上岗的人员体检合格后予以上岗。 4。 建立体检档案，专人保管。
5。 对体检过程中弄虚作假，造成不良影响者，医院将严肃追查，构成犯罪的由司法机关依法制裁。
6. 此项工作由医务科监督执行. 六、考勤制度
1.考勤员应备有缺勤登记薄，详细记载职工迟到、早退、病事假等内容。 2。职工因工作加班应经科领导同意签发加班和补休单，否则不记出勤. 3。请假人员按《请假制度》执行，除急重病、急事可及时委托亲友代办请假手续外,其余均需本人提前办理请假手续.公休、补休应事先得到科主任同意。
4。考勤人员必须秉公办事,如经查实有徇私舞弊现象，将扣发考勤员当月奖金。
七、请假制度
为了加强职工工作责任感，提高职工组织纪律性，维护正常工作秩序，应严格按院人事科规定执行请假制度。
具体参照院人事科规定. 八、人事考核制度
为了鼓励先进，鞭策后进,择优聘用、培训、晋升,并给予合理的待遇,最大限度地调动职工的积极性，形成平等竞争的机制，每年定期对职工进行全面的考核评比工作。
1. 考核内容
1）考德。具体内容包括：
①政治态度：忠于人民,热爱祖国,拥护和贯彻执行党的路线、方针和政策，能正确处理国家、集体、个人三者间的利益关系。
②遵纪守法，自觉遵守国家的各项法律法规,维护国家和人民的利益，遵守
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社会主义公德。
③工作作风：实事求是,不弄虚作假，廉洁奉公,不贪污受贿,不收取红包，坚持原则，敢于同不良倾向作斗争。
2）考绩。具体内容包括:
①工作质量：对工作认真负责，无事故，无差错，质量符合标准，工作令人放心,经得起检查。
②工作效率:工作速度快,效率高,能完成或超额完成规定指标和工作任务。 ③工作成绩：工作出色，成绩突出，成果多，论文多，服务质量高。 3）考勤.具体内容包括：
①事业心和勤奋精神：有事业心，热爱本职工作，平时能抓紧时间学习和钻研业务，工作勤奋，有上进心。
②服务态度：全心全意积极主动为病人服务，态度和蔼。
③劳动纪律：自觉遵守本院及科室的规章制度，不违反劳动纪律,上班时间不做私活,不看与工作无关的书籍。
④团结协作：服从组织分配,尊重上级，团结同事，能顾全大局，主动帮助上级和同事做好各项工作,敢于挑重担.
⑤出勤率高:能出满勤或病事假不超过全年的工作天数的3％。 4)考能。具体内容包括：
技术操作水平程度，工作经验是否丰富，能否带教下级人员，管理能力和计划性如何，能否解决工作中的难题，专业理论基础水平，知识面如何，判断力和处理问题能力，能否主动提出合理化建议和改进措施等等。
2.考核要求：
1)本着“严格与公正”的原则和“实事求是”的态度,不得感情用事，敷衍了事，流于形式.
2）考核结果要与本人见面并签署意见。
3)考核结果装入本人工作考绩档案，交人事科保管。 九、奖惩制度
为增强职工的工作责任感,鼓励其积极性和创造性，维护正常的工作秩序，提高工作效率，促进科室发展，同时职工必须遵守国家的政策、法律、法令，遵守劳动纪律，遵守医院各项规章制度，爱护公共财产，学习和掌握本职工作所需
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要的文化技术、业务知识和技能，团结协作，完成工作任务，并坚持奖惩公正的原则，坚持在纪律面前人人平等，要实事求是地以功过作为实施奖惩的依据，奖惩度必须与功过相当，奖罚分明客观公正，实行奖惩制度必须把思想政治工作同经济手段结合起来，奖励上要精神鼓励和物质鼓励相结合，以精神奖励为主,对违反纪律的职工要坚持以思想教育为主,惩罚为辅的原则。
1。奖励：
（1)忠于职守，成绩优良，遵守纪律，起模范作用的。 （2）在完成工作任务,提高成份用血率方面做出显著成绩的. （3）爱护公共财物，在节约本科资财方面,做出重大贡献的。 （4）其它应予奖励的。 2。惩罚：
（1)违反劳动纪律经常迟到，早退、旷工，消极怠工、没有完成工作任务的。 （2）无正当事由不服从工作分配和调动,或者无理取闹、聚众闹事、打架斗殴、影响工作秩序和社会秩序的。
（3）玩忽职守,违反安全规定和技术操作规程，或者违反规章制度造成事故，使单位财产造成损失，人民生命安全受到危害的.
(4)工作不负责任,经常出现差错，损坏设备工具，浪费原材料,造成严重后果和经济损失的.
十、计算机使用管理制度
各室设置的计算机由经过专业和上岗训练的专人负责管理和使用，其他人员不得乱动设备或上机操作。
1. 使用计算机应严格执行操作规程，不得用于游戏.
2. 定期做好清洁和维护保养工作,发生故障及时报修，保证计算机正常运行。
3. 注意信息，防止计算机病毒污染。
4。 违反管理制度而造成损坏机件者，经查实，按性质和情节，严肃处理。 十一、仪器设备管理制度
随着业务及科研的发展，各种仪器设备不断增加,仪器设备的技术性能更加先进复杂，为搞好科研及业务工作，根据医院有关规定，结合本科的具体情况制订本制度.
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1. 仪器设备根据需要，向院及设备科申请，由设备科统一采购。
2。 万元以上的仪器设备,全部建立技术档案，包括:使用、保管人，购入期，操作日期，操作规程,维修保养，定期核对记录.
3。 仪器设备有专人保管和使用，不熟悉的人员严禁上机。
4。 操作过程中，发现故障或损坏时，应立即停止使用,切断电源进行故障原因分析和报请修理。
5。 根据各种仪器设备使用率的高低，制定年检保养制度及月、周维护细则.可根据经济效益大小，给予一定的奖励。
十二、值班工作制度
本科实行24小时值班制，在值班期间工作人员认真负责地工作态度，优良的服务态度，是做好输血科窗口工作的前提。
1。 接收输血申请时,应认真详细地核对受血者的姓名、性别、年龄、科别、床号、住院号、诊断、血型、用血量、用血时间、既往受血史、妊娠史等情况，标本粘贴联号与申请单联号是否一致。
2。 对危急、危重病人用血应优先处理，优先供给。
3。 发放血液及成份血，严格执行三查三对制度，并及时开具有关票据，记帐，登记.
4。 发放血液及成份血必须严格检查质量,如有任何疑问或异常情况一律不得出库。
5. 负责值班期间输血科的发血,配血工作.
6. 值班者应坚守岗位，不得擅离职守聚众嬉戏，不得让外人在本科长时间停留,打牌，因用膳等暂离，应挂牌说明去向。
7. 交叉配血试验，应严格按规程进行。
7。1。 试验前认真检查受血者输血申请单及标本是否符合要求。 7.2. 交叉配血前须用正、反定型法复查受血者血型. 7.3. 用聚凝胺法或微柱凝胶卡法做交叉配合的试验。 7。4. 及时准确填写交叉配血报告单。
7。5。 安排用血时，应执行先贮存先用，成份优先的原则，避免血液超过保存期.
7.6。 每次交叉试验结束后,及时整理所用物品，保持工作台面的整洁。
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8。 负责处理本班次内的有关事宜。
8.1. 贮存血不足时，应积极设法解决,同时与有关用血科室取得联系。 8。2. 按时检查观察贮存血液的质量,发现问题及时处理，并报告科主任。 8。3。 负责本科的安全保卫工作，做好冰箱和离心机的检查，特别对储血冰箱更应注意,经常检查温度是否符合要求，检查冰箱的报警系统是否正常，显示异常情况时，应及时处理，并向有关人员和科主任报告。
8。4. 负责值班期间的清洁卫生工作，及时做好票据整理登记及次日工作准备。
十三、临床用血计划申报登记制度
1。每周周日、周二和周四中班工作人员向州中心血站申报用血计划 2.中班工作人员在与夜班工作人员交班前，根据输血科库存量向州中心血站通报送血计划并记录在交接班薄上。
3.市中心血站按计划送来的血液，必须专人进行验收、登记，无误后条码扫描计算机录入并分类存放.
十四、配输血查对制度
1. 输血科工作人员认真核查申请单内容及标本质量无误后，根据临床医生申请的血液品种、数量进行配血。
2. 配血者逐项核对病人姓名、性别、年龄、床号，科别，化验单联号，核对准确无误后方可操作。
3。 配血者再次核查血型。血袋上的编号、采血期是否齐全，检查是否是过期血液。
4。 离心时,要注意时间及速度，严格按操作规程办事。
5。 配血完毕再次核对病人姓名、科别、床号、化验单联号、血型、血袋号、血型等，均要书写正规清楚。
6. 接受病房及门诊标本者按化验单要求逐项核对，字体清楚，填写无遗漏，符合要求后方可接收，并签名×××收。
7. 负责清理标本的同志，要认真核对各项，有问题随时与病区联系，输血科人员不能根据电话或口传更改配血单上的项目，需更改时由床位医生亲自更改.
8. 样本处理程序，经“三查六对”后，血型经正反定型是正确的，用红笔
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记录血型，操作者签名。
9。 配好的血液必须由本院的工作人员拿取，病人家属不得取血，血取回后须由两名护士认真核对姓名、年龄、性别、科别、床号、血型等，准确无误后再行输血，输血后血袋送输血科至少保存一天，血标本2—6℃保存7天，血液质量反馈信息要及时反馈。
十五、血型鉴定与交叉配血的复查与核对制度
血型鉴定和交叉配血是受血者的最后检查站，因此严格把关，认真复查、仔细核对是提高安全用血最关键的步骤之一.
1。 将供血者的血液及受血者的标本仔细核对其姓名、床号、血型、编号等，准确无误后准备配血。
2。 交叉配血前再次复检供血者及受血者的血型,有疑问时采用反定型证实. 3. 配血时标明主次管，标明供血者及受血者用于配血的试管,并认真观察有无凝集现象。
4。 配血后再次核对供血者及受血者的血型是否正确.
5。 配血完毕后再次核对供血者及受血者的标本是否完全正确,并保存备查。
6. 登记时再次认真对配血单的各项记录，准确无误后，签名发血。 7. 两人以上值班时，由两人核对签发，一人值班时应认真核查后签发。 十六、血液储存、发放、临床输血和血液报废制度
1。 严格履行用血审批、登记手续。每周一、三、五上午由中心血站专人专车为我院送血，由值班人员和专职人员核对验收无误后入库,输血科拒收私自拿来的血液。
3. 值班人员负责验收数量及质量，发现问题及时与中心血站联系. 4。 全血、红细胞悬液放4℃保存,血浆放-30℃保存，白细胞、血小板、冷淀淀取回后通知病房迅速使用.
5。 供者血经与受者血液交叉配血无凝集无溶血反应后由配血者填配血单并签名，并由患者所在病房的工作人员将配血单与血袋逐项核对无误后签名取走。
6. 在输血前，认真检查血袋等包装是否符合要求，发现问题及时与输血科值班人员联系，否则血液发出后不得退换。
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7。 如果血液超过其使用期限仍未用完，则履行报废手续，由当班提出并写明原因并签字，最后由科主任核实并签名后作报废处理，报废的血液均需由专人登记,并送焚烧炉焚烧处理。如私自报废血液，由此所产生的后果由当事者自负.
十七、血液质量监测制度
1. 血液质量是输血科的根本，各级人员必须树立强烈的责任感和质量意识，使质量管理制度化、规范化、法制化.
2. 所需血制品按医院规定进货、收发、贮存并有详细记录，严把质量关；做到每批标准血清均有效价标定的记录，操作者签名，并详细记录批号有期限，发现问题及时处理。
3。 当班人员负责对中心血站送来的血液进行核对验收工作，准确无误后签名.
4。 配血时注意使用效期内血液,发现下列情况之一者需报告负责人，并与中心血站联系，共同查找原因，属于中心血站者退回，属本科原因者需查明原因,必要时履行血液报废手续。
4。1。 血浆呈暗紫色 4.2。 血液中有大量的凝块。 4.3. 血浆与血细胞分界不清。
4.4。 血浆中逐渐增多的雾状物、絮状物。 4.5。 有气泡,存放一周后仍不消失。
4.6. 有无溶血、脂肪血、过期血、污染血等，并细查血袋上的血型、编号、采血日期是否齐全。
4。7。 血袋由于热合原因而渗漏。
4。8. 经抽检发现不合质量标准的，如全血比积<30%，浓缩血小板数〈4。8×1010/袋，混入的RBC、WBC数量超标者，浓缩RBC比积<70%者，及其它指标不符合者.
十八、仪器设备认购、验收、使用管理、保养、维修及报废制度 1. 输血科的仪器设备在科主任的统一管理下使用。
2。 万元以上仪器先报计划,由设备科或分管院长审批同意后方可按程序选构，小型设备先申请后在设备科领取.
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3. 使用人员具体验收各配件，并负责检查质量。 4. 贵重仪器由专人使用、保管，并配仪器的操作卡。
5. 定期维修保养，发现问题，及时请设备科维修人员进行处理。 6。 仪器经设备科人员维修并认定已不能再投入正常使用后，由科室负责人提出报废申请，经设备科同意后即生效，并由设备科收回旧仪器。
7. 所有的仪器设备均由设备科统一管理，登记造册，备案。 十九、试剂的认购与入库、领用制度
输血科所用试剂质量至关重要，它不仅是结果准确与否的事情，而且是人命关天的事情.因此严把试剂质量关，是杜绝事故的关键步骤之一。
1。 输血科所有试剂均由院试剂招标委员会进行招标采购。
2. 选用正规的试剂厂家，试剂必须标明生产日期和有效期，标准血清需有效价和“批批检”方可使用，否则由此造成的不良后果由购者自负。
3。 购入的试剂必须经招标委员会审核、药剂科查对、科主任验收签名。 4. 试剂用完之前的两周报计划给科主任。
5。 每批试剂需有科室专人验收登记,标准血清要有效价评估. 二十、计量管理制度
计量工作是输血科必不可少的工作之一,定期进行仪器的计量管理，是涉及到贮血、输血安全的保障工作，因此这项工作必须在蚌埠市计量局和我院计量领导小组的统一管理下逐步实施和完善。
1. 医院计量管理领导小组，是全院计量管理的权力机构,科室的计量工作在其具体指导下进行。
2. 贯彻执行国家计量法令，制定输血科计量管理实施细则及落实措施。 3. 加强计量设备、仪器的管理，提高工作效率，保证输血工作的需要。 4。 定期进行科室人员的计量培训、考核.
5. 定期配合计量管理组织进行各类仪器的计量工作，以充分保证仪器的正常运行,提高仪器的准确性。
6。 定期研究探讨科室计量工作中存在的问题，并讨论解决的办法。 二十一、差错事故登记、报告制度
1。 输血科工作人员要以对病人高度负责的精神，认真对待每个血型检测，每个配血标本,尽量减少差错，杜绝事故.
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2。 发现差错或事故后,应及时向科主任汇报,科室要及时向医务科汇报，不得隐瞒.
3。 差错范围如下。
3.1 标本弄错，致使两次血型结果不符（但未造成后果）;
3.2 标本丢失或标本签收后未及时处理,班内未完成而又未及时交班造成不良后果的；
3.3 在抢救急诊病人时,未及时配血(在血源充足的情况下）,或不积极配合联系血源造成不良后果的。
3。4. 由于技术或责任心等问题给病人生命及身心健康造成严重后果的. 4。 发生差错事故后,要及时登记差错事故原因及当事人，严肃认真对待，明确责任，正确处理.
二十二、方便病人配合临床制度
1。 树立一切为病人服务的思想，密切配合医疗、教学、科研，做好各项检验工作.
2. 认真对待每个标本和每一张报告单，如有疑问,找上级检验人员或科室领导解决.
3。 对急诊抢救病人要及时配合，密切协作，做好血源供应，尽快发血. 4。 凡临床诊疗科室，急需配合的要积极合作，不具备条件要努力创造条件。
5。 对病人态度和蔼，解释耐心，待病人如亲人.
6。 对远道来的病人及年老、高干、高知给予方便、优先照顾。 二十三、科学合理用血制度
为了提高血液的使用效率,合理的掌握输血指征,避免血液的浪费，减少输血性传播疾病的发病率,提高输血治疗的作用，特制定如下制度。
1。 严格按照临床用血的指征,进行输注,杜绝“安慰血”、“人情血”的应用. 2。 按由远到近的原则用血,即先用远期的血液，再用近期的血液，以减少血液的浪费。
3. 积极推广成份血的使用，以缺什么补什么的原则,最大限度地发挥血液的使用效能。
4. 避免原料浆的使用。
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5。 大力提倡自体输血。 二十四、紧急用血制度
临床急救紧急的情况下需要输血者，血液申请程序（见表）要通过紧急渠道申请(通知医院分管领导、医务科及输血科领导同意启动紧急用血程序）。患者抢救完成后，要对具体程序进行规范。
表 紧急情况下血液申请程序
1.紧急情况下给患者插入静脉插管，并用该插管采集配合试验用的血样，建立静脉输注通路，尽可能快地将血样送到输血科。
2.每个患者的血样管和用血申请单上应该清楚地贴上有患者姓名和唯一标识的住院号标签。如无法识别患者，应该使用某种紧急入院号或标识。仅仅在确信获得了患者准确信息后，才使用姓名。
3.如果你在短时间内发出了另外一份针对同一患者的用血申请单,使用与第一份申请单和血样上相同的标识编号,以便输血科工作人员知道他们的处理是同一名患者。
4。如果有多名工作人员处理紧急情况，其中应该有一名负责血液申请并和输血科进行联系。如果同时有多名受伤者，这一点尤为重要。
5.告诉输血科（血库）,每个患者需要在多短时间内得到血液,说明血液需要的紧急程度.
6。确定你和输血科人员已经知道
（1)谁将把血液送到患者身边？或者谁将去血库领取血液； （2)患者会在什么地方：例如，手术室/抢救室/其他地方.
7。输血科可能会发O型血液或Rh（D）阳性给特殊患者，但需经医院分管领导、医务科同意。
8。输血告知随后补签。
二十五、输血治疗知情同意制度
1。依据《执业医师法》、《医疗事故处理条例》、《临床输血技术规范》等，凡在医院进行输血治疗的患者(包括门诊患者）均应签署输血治疗同意书。
2.使用卫生部统一制定的输血治疗同意书，并告知输血的必要性及可能存在的危害.
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2。输血治疗同意书由临床医师、患者本人或患者监护人共同完成。 3。临床护士、输血科工作人员有督促、监督输血治疗同意书完成的签署责任和义务.
4。对于未签署输血治疗同意书者，输血科工作人、临床护士有权拒绝发血和输血.
5.若为紧急危重抢救患者输血，且患者家属不在场时，可由经治医师和上级医师签字,同时报上级主管部门同意备案，并记录病程，随后补签。
二十六、各种登记记录管理和保存制度
1. 血型鉴定、交叉配血的标本，要认真核对后登记签名。 2. 血液、试剂的出入库要仔细做好登记记录. 3. 血型鉴定、交叉配血单实行双查双签。 4. 所有登记记录均按有关规定时间保存10年。 二十七、库房管理制度
1。输血科应备有专用库房，储放各类消耗品，仓库内应保持阴凉、干燥和通风。
2.领取各类消耗品应由仓库管理人员和领取物品的同志共同登记核对，签字后发放。
3。仓库管理人员应对各类消耗品施行定额管理.
4。定期清点库房，以防各种物品过期，各类消耗品在将用完之前应及时订购，以免影响工作。
5。仓库内各类物品的摆放应整洁有序，并保持仓库内清洁卫生。 二十八、档案保管制度
二十九、输血不良反应报告和处理登记制度
1、发生输血不良反应后(特别是怀疑溶血反应或细菌污染输血反应),对症治疗和调查分析应立即、同时进行.
（1)立即停止输血，保持静脉输液通道,报告经治医生或值班医生，同时报告医务处（医务科）及输血科，观察剩余血液外观及封存剩余血液，填写输血不良反应回报单。
（2）采集患者血样及血袋剩余的血送输血科(或血库)检测分析；
（3留取患者输血反应后第一次尿样送检验科检测（急性溶血性输血反应由
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血管内溶血引起,尿中含血红蛋白)； （4)抢救患者
2、血库收到输血反应的样本后，应当立即分析： （1）、复核用血申请单、血袋标签、交叉配血记录；
（2）、复核患者ABO血型(输血前留置样本，反应后 采集的样本); （3）、复核输血前留置的献血者血样本及血袋中剩余血的ABO血型 ; （4）、患者输血前、后样本与血袋中剩余血交叉配血试验，采用盐水凝集法与抗球蛋白法（或凝聚胺法、酶法）； （5）、患者输血前样本Rh血型检定; （6）、抗体筛选，抗体鉴定;
（7)、患者输血后血标本和剩余血涂片检查和细菌培养（分别在4℃、22℃、37℃作需氧菌和厌氧菌培养)。
（8）、检查输血使用的技术、设备、试剂等是否符合质量标准，包括ABO，Rh（特别是抗—D）定型血清，试剂A、B、O红细胞,抗球蛋白(或凝聚胺、酶），抗体筛选细胞（可用3～5个O型人红细胞混合代替），抗体鉴定谱细胞（panel cells）。
三十、 交接班制度
1. 接班者准时到岗准备交接班工作.
2。 接班者认真做好各储血、储试剂冰箱及水温箱的温度记录。 3. 交班者详细清点库存的各种血液成分及数量，做好交班记录。 4。 交班者详细告知目前的工作情况. 5. 交班者应整理好工作台的各种物品。
6. 接班者核查库存的各种血液成分及数量，确认无误后双签名。 三十一、 血液标本的采集接收保存制度
1. 病人的输血标本由本院医护人员根据申请检验的目的和要求,持贴有申请单联号或条形码（患者信息）的采血管，当面核查后抽血3-5毫升，由专人送输血科（不许家属送标本）。
2。 输血科专人签收血液标本，当面核查申请单的内容、检验目的和要求，确认无误后登记签收.如发现有任何问题必须由输血科当班者与申请医师亲自处理。
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3. 配血前的标本在输血科保存3日，配血后的标本保存7日。 备注
1。 所用血样要能够恰当地反映受血者当前的免疫学状态，《临床输血技术规范》规定受血者配血试验的血标本必须是输血前3天之内的。如果受血者需要继续输注红细胞,再次申请输血时（超出24小时），应该重新采集一份血样进行交叉配合试验。
2. 要防止血样溶血，溶血的标本不能使用,因溶血后的游离血红蛋白可以掩盖抗体引起的溶血.
3. 不允许从输液管中抽血(血液被稀释）,如遇紧急情况时，要用生理盐水冲洗管道，并弃去最初抽取的5ml血液后再采集标本。
4。 若受血者已用肝素治疗，应在采集血样时注明，同时通知输血科。 5。 右旋醣酐等中高分子药物可干扰配血，应在药物输注前采集血样备用
三十二、实验室管理制度
1. 开展新的实验项目，应根据临床需要，由实验人员提出，经领导批准,方可进行。
2. 进入实验室的人员，必须穿戴工作衣、帽，必要时应着防护隔离服。 3。 进行试验时，必须严格遵守操作规程,定期检查试剂、计量器皿，校正仪器灵敏度，保证试验质量.
4. 实验人员应当认真核对试验结果，发现结果可疑应及时复检,并详细填写报告单和做好登记、统计工作。
5. 一般标本和用过的检验器皿应立即清洗、消毒，有传染性、中毒性、带菌、带毒的污物、动物、器械等，均须按规定先消毒后处理，不得随便乱放或倒入下水道。
6。 进修、实习人员，须在带教老师指导下进行实验。
7. 爱护仪器设备。精密仪器须指定专人负责使用、保管和维修。仪器、设备一般不外借，特殊情况须经领导批准。
8。 保持实验室清洁、整齐、肃静,定期消毒，室内禁止吸烟。
9. 注意安全，下班前认真检查水、电及易燃性试剂，防止意外事故的发生。
第五节、岗位职责
一、输血科主任岗位职责
1。 坚持党的基本路线，坚持两个文明建设一齐抓，努力提高全科人员工
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作的积极性和创造性。
2。 在院长的领导下，负责输血科的全面工作。
3. 根据工作需要,合理设置科室机构，保证血液质量和输血安全。 4. 领导制订科室长远规划和年度计划,并认真组织实施，做到有检查、有总结,定期向上级主管部门汇报.
5。 建立建全各项规章制度，实行全面质量管理，保证血液质量和临床输血的需要,指导临床合理用血。
6. 认真做好管理工作，大胆探索，勇于改革,增强科室活力，不断提高社会效益和经济效益。
7. 决定和安排各项学术交流和科技合作,引进新技术新方法，加快输血医学的发展。
8。 负责全科工作人员业务培训，进修实习人员安排与外单位或其它科室合作。
9。 完成上级主管部门交办的其他工作任务. 二、主任、副主任技师岗位职责
1. 在输血科主任领导下，负责指导本科的教学、科研、技术培训与理论提高工作。
2. 督促本科人员认真执行各项规章制度及操作规程，严防差错事故的发生. 3。 参加临床输血工作，担任教学，指导和培养进修实习人员，指导各级人员开展质控工作,负责解决本专业复杂，疑难问题.
4。 协助科主任制订本科科研计划,学习和运用国内外先进技术，加强与临床各科室的联系，不断总结经验,改进工作。
5。 推广成份用血。 三、主管技师职责
1。 在科主任领导下，负责指导本科的教学、科研及输血工作。 2。 参加临床输血工作，负责检查血液质量及用血信息反馈，解决业务上的复杂疑难问题。
3。 协助科主任制订科研规划，并督促实施，学习运用国内外新技术，不断提高输血疗效。
4。 负责进修实习人员的业务指导，做好本科技术人员的培养提高工作。
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四、输血科技师岗位职责 1. 在科主任领导下进行工作。
2. 督促检查各项规章制度和技术操作规程的执行,严防差错事故。 3。 经常检查血液质量，做好血液的储备工作。 4. 指导或参加血型的鉴定,交叉配血试验和发血工作。
5。 主动深入临床科室，了解输血情况，根据需要配合临床,开展科学研究工作。
6。 负责临床教学、业务学习,搞好进修、实习人员的培训。 7. 检查或填写输血科各项登记、统计报表。 五、输血科技士岗位职责
1。 在输血科技师的指导下进行工作.
2。 负责血型鉴定，交叉配血试验和发血工作，严格遵守查对制度，严防差错事故。
3。 负责冰箱的管理，血液的储备，血液质量的检查。 4。 负责药品器材及其它物品的保管工作.
5. 负责配血室内的消毒工作，定期检测室内环境卫生.
六、临床医师用血时的职责
1、输血前谈话制度。
2、临床医师必须严格掌握输血指征,做到能不输血者坚决不输；能少输血者决不多输；如有输血指征要开展成分输血，尽可能不输全血.若患者符合自身输血条件，则应积极开展自身输血，不输或少输同种异体血；
3、临床医师要熟悉采供血机构所提供的血液及其成分的规格、性质、适应证、剂量及用法;
4、输血治疗时，临床医师须向家属或病人说明输血目的及可能会产生输血不良反应和经血液传播的疾病，征得家属或病人同意并签订输血同意书。输血同意书必须与病卡分时存档;
5、患者要进行输血前检验(包括ABO、Rh(D)血型系统,抗体筛选，HBsAg、抗HCV、抗HIV、梅毒等）;
6、在输血过程中，临床医师必须严密观察病人的病情变化,如有异常反应，严重者要立即停止输血，迅速查明原因并作相应处理。所有输血不良反应及处理
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经过均应在病历中作详细记录。严重输血不良反应要及时向输血科（血库)及医务科报告；
7、输血治疗后，临床医师要对输血的疗效作出评价，还应防治可能出现的迟发性溶血性输血反应。
七、临床护士用血时的职责
1、在输血前由2名医护人员对输血申请单、交叉配血试验报告单和血袋标签上的内容仔细核对,并检查血袋有无破损及渗漏，血袋内的血液有无溶血、混浊及凝块等；
2、临输血前，护士应到病人床边核对受血者床号、住院号，呼唤病人姓名以确认受血者。如果病人处于昏迷、意识模糊或语言障碍时，输血申请单不能认证病人。这就需要在病人入院时将写有病人姓名和住院号的标签系在病人的手腕上,保留至出院为止；
3、核对及检查无误之后，遵照医嘱,严格无菌操作技术将血液或血液成分用标准输血器输给病人；
4、输血时要遵循先慢后快的原则，输血开始前15分钟要慢（每分钟约2毫升）并严密观察病情变化，若无不良反应，再根据需要调整速度。一旦出现异常情况应立即减慢输血速度，及时向医师报告；
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第二章 仪器、设备使用操作规程
一、低温冰箱使用及注意事项 1. 低温冰箱不要与多用插头相接。
2. 若遇停电，应拔下电源插头，切断电源。
3。 放置物品,应轻拿轻放，以免将箱体内壳碰坏或损坏冷冻物品。 4。 保证箱盖密封圈干净，避免其与含油和多脂物质接触. 5。 长期不用低温冰箱，应切断电源，并除霜后清洗干净。 6。 箱体不得靠近热源。
7。 使用中如若出现问题请电工或专业维修人员检修。 8. 按时每周进行一次清洁消毒，每月进行一次空气培养。
9. 每天交接班，要认真检查冰箱温度并记录，若有问题随时和有关人员联系。
二、离心机使用注意事项
1。 应将离心机放置在水平、稳固的台面上。 2。 离心前尽量平衡，以防振动和试管破碎. 3. 开机前关好盖子，并锁上锁扣。 4。 离心过程中不得开盖。
5. 使用完毕后用软布将离心机内壁及外壳擦洗干净，罩好外罩。 6。 电源必须接地。 三、储血冰箱使用及注意事项
1. 尽量减少开门时间，在取血时动作要快。
2. 及时化冰,自动除霜,要按时每周进行一次清洁消毒，每月进行一次空气培养.
3. 每天交接班，要认真检查冰箱温度并记录，若有问题随时和有关人员联系.
4。 电压若有问题，值班者要及时和电工取得联系。 5. 冰箱使用过程中,有问题及时请维修人员检查修理. 6。 定期请有关人员来检修.
7. 在使用过程中，要爱护、谨慎使用,以延长使用寿命。
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四、恒温水浴箱使用及注意事项
1。 恒温水浴箱在连接电源时，应先放入蒸馏水，以免烧坏电热管。 2. 放置物品应轻拿轻放，以免损坏箱体及内壳. 3. 经常置换箱内水，保持清洁，延长使用期. 4。 箱内要使用蒸馏水,以免产生水垢，损坏恒温箱。 5. 每日交接班及时检查恒温箱温度。
6. 恒温箱使用中，如出现问题及时请维修人员修理. 五、贮存试剂冰箱使用注意事项
1。 冰箱内试剂应分门别类，放置整齐有序. 2. 有腐蚀性、挥发性试剂应妥善包装方可放入冰箱。 3。 拿取试剂应快速准确，尽量缩短开门时间. 4. 定期除霜，清洁冰箱内外壁。 5。 电源应接地，以防漏电。
6. 搬动冰箱之前，应先取出内部试剂。
7. 按时每周进行一次清洁消毒,每月进行一次空气培养。
8. 每天交接班，要认真检查冰箱温度并记录，若有问题随时和有关人员联系.
六、热合机使用操作规程 1. 开启主电源.
2. 扫除管道内的血液,然后置入高频头，同时压下自动热合开关。 3。 等热合机高频头自动离开后，取出塑料管道。 4。 较长时间不用时，应关掉主电源. 5. 用毕将高频头擦拭干净. 七、净化操作台使用规程 1.首先接通电源泉 2。打开并关通电 3.接动绿钮后开始工作
4.工作完毕后按动红钮，此时工作台停止工作 5。关闭开关断电 6.切断电源
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7.工作完毕后必须切断电源
8。工作完毕后必须擦净工作台内的血迹及其它污垢 9.工作过程如发现有异常声音应立即关机并查找原因 八、血浆融化仪使用操作规程
将冰冻血浆装入随机提供的专用塑料袋后再放入解冻专用夹，并挂放妥当，承受后把装有冰冻血浆的专用夹放入解冻槽内进行解冻(装入专用塑料袋内解冻具有防止污染，避免条型码受潮而影响识别等优点，但需适当延长解冻时间。）
1.预温未完成状态下解冻：按“启动”键，即进入待解冻状态，此时“解冻”灯闪烁。待预温完成,自动进入解冻程序.
2.预温完成状态下解冻:按“启动”键，立即进入解冻状态，此时“解冻”灯亮，机器开始计时,循环泵将水打入解冻槽。解冻时，循环水不停地将冷却水回入加热箱再加热，热水不断补充。当时间显示与设定值一致时，解冻程序结束，“完成”灯亮,循环泵自动关闭。解冻槽内的水流回加热箱，并发“嘟-”一长声提示音。
九、血小板振荡保存箱使用操作规程
1。血小板振荡保存的温度为20-24℃，一旦温度设定切勿随意更改。 2。开门取，放血小板应尽快完成.
3.每天至少两次观察保存箱的温度及振荡是否正常。 4。遇到报警应查明原因，如出现故障请专业人员来维修. 十、电烤箱使用操作规程 1。电烤箱必须由专人负责使用。
2.使用电烤箱烘烤物品到达设定的温度时应及时关闭烤箱. 3。不得在烤箱内放置其它无关物品，尤其是易燃物品. 4.电烤箱出现故障时，请电工或维修人员进行修理。
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第三章 血液入库检查操作规程
一、血液入库储存发放规程
1. 遵照卫生部“三统一\"的原则，我院输血科不自行采血,全部血液来自中心血站.
2. 每周一、三、五上午由值班人员向血站报要血计划，由血站专职人员送血上门.
3. 要血计划根据当天冰箱的库存量,和临床用血的申请单数量来决定。 4. 血液送来后由值班人员逐项核对数量及型号，并做好入库记录。 5。 准确无误后由值班人员签名，然后迅速将血液放冰箱保存备用。 6。 入库的血液不同型号分型存放,同一型号不同容量分别存放。 7． 血液的发放根据患者的情况，科学合理的对待. 8． 发放时使用规范的交叉配血方法并观察血液的质量. 二、血液质量检查规程
1. 血液质量的全面检查及复检工作均由市中心血站来完成，我院输血科仅对由血站送来的血液进行外观检查。
2. 对血液进行外观检查：血袋包装是否完整，供血机构名称及其许可证号、标签上血型、血编号、血液品种、容量、采血日期、血液成分的制备日期及时间、有效期及时间、储存条件等是否完好清晰,血液有无溶血、脂血、凝块等现象，一旦发现问题，及时与中心血站联系，协商解决问题。
3. 不定期对所拿回的血液进行抽检，详细资料见血液质量监测记录本。
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第四章 输血相容性检测作业指导书
作业指导书是临床实验室开展日常工作的指导性文件，是所有参与检验前、检验中、检验后过程的工作人员必须遵守的操作行为指南.本章重点介绍解放军总医院输血科实验室现行使用的样本管理类、试验方法类和仪器设备类作业指导书16个，供广大同行参考。
第一节 样本管理类作业指导书
输血相容性检测标本采集与处理程序如下。 （一)目的
有效指导输血相容性检测标本的采集、接收及保存，使标本中的待测成分不受影响，标本量能够满足检测的要求，保证检测结果准确可靠。 (二）范围
适用于ABO、Rh血型鉴定、稀有血型抗原测定、不规则抗体筛查与鉴定、交叉配血、抗体效价测定、吸收放散试验、抗人球蛋白试验等标本的采集、接收及处理。 (三）职责
1.静脉血液标本由临床医护人员采集,实验室工作人员有义务向临床提供各检测项目标本采集的类型、标本量、保存条件、注意事项及临床意义等。 2。血液标本应由临床专职外送人员、临床医护人员进行运送或由标本物流传输装置自动传送。
3.操作人员将检测后标本按照标本保存和处理相关规定进行处置。
（四）工作程序
1。患者准备及原始标本识别
（1)患者血液采集前，应避免跑步、骑自行车、爬楼梯等剧烈的运动,要求患者休息15分钟后进行采血。冬季采血时应保持血液循环通畅.
(2)静脉血标本由临床医护人员采集,遵照医嘱准备好标本采集前所用的容器以及消毒器材、一次性注射器、标本条形码、检验申请单或输血申请单等备用。首先确认患者姓名、病案（ID）号和血型，并将姓名、ID号、血型和（或）标
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本条形码写在(贴于)采血真空试管上。
（3)采血前应向患者做适当解释，以消除其疑虑和恐惧。如遇患者采血后发生晕厥,可让患者平卧，通常休息片刻即可恢复。必要时可嗅芳香氨酊，针刺或指掐人中、合谷等穴位。
（4)标本条形码上的申请单号(或申请序号）是原始标本的唯一标识。 2。临床医生的指导
(1)临床医生必须对患者讲清楚输血相容性检测的目的、采血时间(住院患者应在早晨卧床时采血；其他人员最好在空腹时采血，急诊除外）及相关注意事项. （2)临床医生应向患者讲清楚采集血液标本前，使用青霉素、非那西丁、氨基比林、磺胺、甲基多巴、肝素、右旋糖酐等药物可能会影响检验结果。临床医生若确认患者近期使用过上述药物,应在申请单中注明或直接通知输血科工作人员,以利于试验结果的正确判断。 3.申请单的填写、处理及保存
（1）临床医生在开具输血申请单或输血相容性检测申请单时，应采用计算机程序进行申请，填写完整。门诊患者包括患者姓名、性别、出生日期或年龄、申请科室、病人ID号、申请日期、标本类型、临床诊断、申请检验项目及特殊说明等；住院患者还需要住院号。输血申请单还需要填写患者输血前检测项目结果，包括ABO及RhD血型、血红蛋白含量、白细胞计数、血小板计数、ALT、HBsAg、抗HCV、抗HIV、梅毒等检验结果。
(2）临床医护人员:根据申请单类别，做好标本采集的准备工作.医护人员采集完血液标本后应在输血申请单或检验申请单上注明采集者姓名及采集时间。 （3）输血工作人员:必须在收到临床医生电子打印的、信息完整的输血申请单或检验申请单时，方可接收标本并实施相应的检验。 (4）输血申请单、相容性检测申请单:至少保存10年.
4.输血相容性检测标本采集容器及必需添加剂、标本采集的类型和量 标本采集容器是一次性含EDTA-K2或EDTA-K3抗凝剂的真空采血管(规格：12mm×l00mm,紫色)；标本采集的类型是静脉血(特殊情况下可以使用动脉血）；标本量是抗凝血≥3ml. 5。标本采集方法
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(1)标本采集方法。①静脉血液标本采集过程：临床医生开具申请单→临床护士审核合格后,打印申请单条码，检查真空管条码与申请单是否一致→患者做好准备→找好采血静脉并消毒→使用装有EDTA-K2或EDTA-K。的真空管采集静脉血3ml以上→千棉签压迫针刺处→充分混匀标本(在检验申请单上注明标本采集者姓名和采集时间) →送至输血科检测。②静脉血液标本采集部位：通常采用肘部静脉，优先选择顺序是肘正中静脉、贵要静脉、头静脉；如肘部静脉不明显时，可改用手背静脉或内踝静脉，必要时也可从股静脉采血。儿童可用颈外静脉采血，但有危险性，以少用为宜.为保证检测结果准确性，不能在静脉输液同侧臂或输液三通处采集静脉血液标本。③真空采血法：采用真空采血装置（备有软橡皮套管式止血装置)，穿刺回血后,即可将另一端的硬插管插入真空定量的采血试管内，血液足量后，拔出硬插管即止血.整个采血过程无血液外溢和污染.④注射器采血法：血管条件不好时，也可以采用注射器采血，采完后去掉针头，拔掉真空管塞，将静脉血沿试管壁缓慢注入试管内，重新塞紧试管塞。
（2）标本采集注意事项.①严格按照无菌技术操作（除按规定穿戴工作服外,还应戴一次性手套和口罩)，防止患者采血部位感染，保证一人一针，杜绝交叉感染。真空采血过程一般情况无血液外溢和污染,如果有血液标本外溢应立即对其用0。2％过氧乙酸溶液或75％乙醇溶液消毒处理。标本采集过程中，对所使用的采集材料应妥善处置，严格执行无菌操作，使用合格的材料，使用前进行严格检查,保证安全;采血人员对所采集的标本应作好登记，并签名。标本采集过程完成后，对所使用的采集材料应及时、妥善处置，保证环境和人员安全。②静脉采血时，止血带压迫时间宜〈1分钟,若止血带压迫>2分钟，大静脉血流受阻而使毛细血管内压上升,可有血管内液与组织液交流，影响检测结果。③抗凝管采集血液标本后，立即将试管轻轻颠倒5、6次，使血液与抗凝剂充分混匀。④采血时，应尽量避开水肿、血肿部位、输血同侧手臂、瘢痕部位、动静脉瘘管或任何导管同侧手臂以及静脉输液同侧手臂. 6。安全处置
(1)锐利(注射器）器具：①不把用过的锐利器具（注射器等）传递给别人;②不要向用过的一次性注射器针头上套针头套，也不要用手毁坏用过的注射器；③把用过的注射器直接放到专门的容器中,统一处理；④勿将锐利废弃物同其他废
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弃物混在一起；⑤勿将锐利废弃物放在儿童可以接触到的地方。
(2）废弃物：①处理废弃物必须采用适当的防护设施，常用的防护设施包括乳胶手套、口罩、防护眼镜、隔离衣等。②没有被污染的废弃物可以按一般性废弃物处理(装入黑色袋）；污染的废弃物可以按医疗废弃物(感染性废弃物，装入黄色袋）处理。
(3）意外情况处理：①皮肤有损伤或针刺时，建议尽可能挤出伤口血液，用大量的水冲洗；然后用灭菌生理盐水彻底清洗伤口处，并用75％乙醇溶液消毒；最后用防水的敷料包扎伤口；当皮肤损伤或针刺时，怀疑可能有HIV、HBV、HCV感染,立即进行医疗处理并采取有效的医学预防措施如立即注射乙肝疫苗。专家建议在4～6周检测抗体，周期性复查（6周、12周、6个月），并将结果上报有关部门。②如果被血液或体液喷溅眼睛、黏膜，立即用大量清水或生理盐水冲洗15~20分钟;如果被血液或体液喷溅皮肤，用肥皂液和流动水清洗污染的皮肤,再用75％乙醇或0。5%碘伏进行消毒；怀疑接触HIV、HBV、HCV感染者的血液时，立即进行医疗处理并采取有效的医学预防措施如立即注射乙肝疫苗。专家建议在4～6周检测抗体，周期性复查（6周、12周、6个月），并将结果上报有关部门。③处理溢出物必须采用适当的防护设施，常用的防护设施包括乳胶手套、口罩、防护眼镜、隔离衣等；患者标本污染环境时，用卫生纸将溢出物吸收,然后用0.2%过氧乙酸溶液或次氯酸钠（有效氯为1 000~2 000mg／L）溶液擦拭消毒，必要时采用紫外线照射对环境进行消毒处理；患者标本污染衣物时，尽快脱掉污染衣服以防止感染物触及皮肤,将已污染的衣物进行适当的消毒处理。如果被患者标本污染的衣服触及皮肤时，应尽快脱掉被污染衣服并进行淋浴；怀疑标本有传染性疾病，同时应采取有效的医学预防措施。 7。血液标本的运送
（1)门诊患者的血液标本由综合治疗室负责采集，输血科人员每天定时收取；住院患者的血液标本由临床专职外送人员或医护人员运送。 （2)送检地点：外科大楼一层输血科标本收取窗口。
（3）输血相容性检测标本采集后应立即送检,临床科室不应保存相关标本. (4)血液标本的运送必须保证运送过程中的安全,防止溢出。 8.输血相容性检测标本的接收与拒收的标准
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(1)实验室接收合格血液标本的标准:①输血申请单或输血相容性检测申请单应为电子格式(急诊科患者除外），内容必须齐全，签字、审批符合程序，血液标本容器标志应符合本程序相关要求，标本标志应与申请单的相应内容完全一致;②标本种类(含EDTA—K2或EDTA-K3抗凝剂的静脉血）、标本量(抗凝血3.0ml以上）符合所申请试验的要求；③血液标本采集后应立即送检。 （2）实验室拒收血液标本的标准：①在一般情况下，血液标本不符合上述接收标准的，血液标本拒收；②标本凝血、溶血者拒收;③血液标本在运送过程中,容器破裂、标本外溢者拒收.
(3)实验室接收不合格血液标本的说明：当患者处于休克、昏迷或为婴幼儿等特殊情况,血液标本量采集困难，标本量不足3。0ml，但离心后能够满足手工操作所需，实验室可以接收此类不符合接收标准的标本，但必须与临床医生联系,经临床医生同意后，实验室方可接受血液标本，并在申请单上注明。
（4)拒收标本应及时通知临床医生或护士,但原始标本由实验室保存，其他人员未经允许不得取走。
9。血液标本的保存 输血相容性检测的标本原则上在检测前不保存，收到标本后应立即进行相关检测，如果暂时无法完成检测，可室温短期保存（一般不超过6小时）.
10。附加检验项目及时间限制 输血相容性检测静脉血液标本的附加检验项目主要为交叉配血，若原始标本有足够的标本量,在血液标本收到后72小时内可提出附加检验申请.
11。因分析失败而需再检验标本的处理
（1）输血相容性检测因标本蛋白凝块、球蛋白含量异常等原因无法得到准确结果时，应根据具体情况将试验转入手工操作，排除标本异常对自动化仪器的不良影响，以获得可靠的试验结果。
（2)输血相容性检测因仪器运行异常或仪器没有吸到血液标本，导致仪器检测不出结果,应重新对原始血液标本进行检测.
（3)因特殊、疑难血清学表现,无法获取实验结果，而血液标本已经用完时，可以要求临床科室重新抽取标本，进一步进行相关检测。
12。医疗废物的处理 检验过程中产生的各种废物，按《医疗废物(液）管
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理程序》进行处理。
13.已检标本的处理存放 已经完成输血相容性检测的静脉血标本在4℃条件下保存72小时，72小时以后转入待处理标本冰箱,继续存放96小时后按《医疗废物（液)管理程序》处理。
第二节 试验方法类作业指导书
一、ABO及RhD血型鉴定试验标准操作规程
(一）检验目的
检测红细胞表面ABO血型抗原、RhD抗原及血清(或血浆)中抗A、抗B抗体，确定受检者ABO及RhD血型。 (二）检验原理
1。手工试管法、玻片法或纸板法 利用标准IgM抗A／B血清鉴定红细胞表面ABO抗原即正定型，利用已知ABO血型反定型红细胞鉴定同一标本血清(或血浆）中的抗A／B抗体即反定型，综合正反定型结果确定受检标本ABO血型；利用标准IgM抗D直接鉴定RhD血型。
2.微柱凝胶法 ABO／RhD卡的微管中装填有葡聚糖凝胶颗粒和抗A、抗B、抗D标准血清，如果红细胞表面存在A或B或D抗原，就会与对应的抗体发生凝集反应,凝胶颗粒具有分子筛的作用，可以阻滞凝集的红细胞在离心力的作用下通过凝胶颗粒，使其悬浮在凝胶颗粒中，未凝集的红细胞则可以通过凝胶颗粒到达微管底部.
3。玻璃珠微柱法 ABO／RhD卡的微管中装填有玻璃微珠和抗A、抗B、抗D标准血清，如果红细胞表面存在A或B或D抗原，就会与对应的抗体发生凝集反应，玻璃微珠具有分子筛的作用，可以阻滞凝集的红细胞在离心力的作用下通过玻璃微珠,使其悬浮在玻璃微珠层的上端，未凝集的红细胞则可以通过玻璃微珠之间的微小空隙到达微管底部。 (三)适用范围
适用于手工、半自动、全自动ABO血型及RhD血型鉴定试验。 (四)设备性能参数
各种血型检测系统性能指标参见相应血型检测系统说明书.
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（五）器材与试剂
1.器材WADiana全自动血型配血系统、SWING—SAXO血型配血系统、Techno全自动血型配血系统、Othro AutoVue Innova全自动血型配血系统、B600-A型低速离心机、KA—2200血清学专用离心机、阅片灯箱、塑料软试管、塑料硬质试管(100mm×12mm和75mm×l2mm)、血型鉴定专用纸板、玻片、试管架、一次性塑料滴管、记号笔。
2.试剂Diana DG Gel ABO—CDE血型卡、DiaMed ABO／RhD血型卡、OTHROBiovueABO／RhD血型卡、2％氢氧化钠溶液、生理盐水、抗A／B标准血清、抗D标准血清、3％～5％反定型试剂红细胞、1％反定型试剂红细胞。 （六）标本要求
EDTA-K2或EDTA—K3抗凝静脉血≥3ml经B600-A型离心机在1760g条件下离心5分钟,离心后无溶血及明显乳糜。紧急情况下可以使用抗凝动脉血。 (七)校准步骤
各类血型配血系统的校准操作过程分别见《WADiana全自动血型配血系统标准操作规程》《SWING-SAXO血型配血系统标准操作规程》《Techno全自动血型配血系统标准操作规程》《Othro AutoVue lnnova全自动血型配血系统标准操作规程》.
（八)操作步骤 1.试管法
(1)ABO血型正定型试验:①取两支洁净试管，做好标记，按试管标记向试管中加入抗A、抗B血清各1滴；②向每管中各加入1滴3%～5％被检红细胞盐水(血清或血浆）悬液；③轻轻混合试管内容物，经KA—2200离心机在1000g条件下离心15秒；④结果判断：将试管拿成锐角，缓慢倾斜,使液体通过细胞扣,当细胞不再附着在试管上时，继续缓慢地倾斜和振摇，直到形成均匀的细胞悬液或凝集块；⑤记录结果：记录观察到的凝集程度或溶血程度。用ABO反定型试验进一步验证正定型结果。
(2)ABO血型反定型试验：①取两支洁净试管，做好标记，向每管中各加2滴被检血清（或血浆）。②按试管标记向试管中加入3％～5％A型、B型试剂红细胞各1滴.③轻轻混合试管内容物,经KA—2200离心机在1000g条件下离心15
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秒。④结果判断：将试管拿成锐角,缓慢倾斜，使液体通过细胞扣，当细胞不再附着在试管上时,继续缓慢地倾斜和振摇，直到形成均匀的细胞悬液或凝集块。⑤记录结果：记录观察到的凝集程度或溶血程度.与正定型结果进行相互验证。⑥如果反应较弱，可将试管于室温(或4℃）放置5～10分钟,以促进弱抗体的反应，再离心观察结果。如果反应还是很弱可以增加血清 （或血浆）滴数，最多增加到6滴以加强反应。
(3)RhD血型鉴定试验：①取一支洁净试管，做好标记，加入抗D血清1滴；②向试管中加入1滴3%～5％被检红细胞盐水（血清或血浆)悬液；③轻轻混合试管内容物，经KA—2200离心机在1000g条件下离心15秒；④结果判断:将试管拿成锐角,缓慢倾斜，使液体通过细胞扣,当细胞不再附着在试管上时，继续缓慢地倾斜和振摇,直到形成均匀的细胞悬液或凝集块；⑤记录结果：记录观察到的凝集程度或溶血程度。 2.玻片法
(1)ABO血型正定型：①在标记的玻片上分别加1滴抗A、抗B标准血清，再各加1滴红细胞悬液（按试剂说明书的要求配置受检者红细胞浓度）。②用干净的玻璃棒将红细胞悬液和试剂充分混合，并把混合物均匀涂开,使其覆盖约20mm×20mm的面积。③缓慢连续倾斜转动玻片2分钟，观察结果并记录。不要把玻片放在加热的表面物上，以防水份蒸发。④结果判断：凝集或发生溶血为阳性结果；细胞混匀2分钟后仍呈悬液状态的为阴性结果;对结果有怀疑，应用试管法重复实验。⑤注意事项：玻片试验不适用于ABO反定型试验；不要混淆玻片边缘干燥的红细胞与真凝集。
（2)RhD抗原定型试验:①在一块标记的干净玻片上加1滴IgM或抗D标准血清。②在第二块标记的玻片上加1滴合适的对照试剂。③在每块玻片上加1滴受检者40%～50％红细胞悬液。④用玻棒将细胞悬液试剂充分混合，并把混合物均匀涂开，使其覆盖玻片20mm×20mm面积.⑤把两块玻片同时放在观察箱上，缓慢连续倾斜转动并观察凝集.多数试剂要求试验必须在2分钟内判读结果。⑥结果判断：当含有抗D血清的玻片上出现红细胞凝集而对照玻片上是均匀红细胞悬液时为阳性结果;当含有抗D试剂的玻片和对照玻片上都是均匀的细胞悬液时，提示是阴性结果，如果要进行RhD阴性确认试验，可参照《RhD血型确证
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试验(卡式抗人球法)标准操作规程》；如对照玻片上出现凝集,在未经进一步试验之前，不能解释为阳性结果；玻片边缘附近的红细胞干涸不应该混淆为凝集。 3。纸板法（ABO血型正、反定型及RhD定型同时鉴定) （1）取洁净五孔血型鉴定专用纸板，做好姓名标记。
(2)按纸板标识向每孔中分别加入相应试剂抗A、抗B、抗D血清各1滴以及受检者血清各2滴.
(3)各孔中分别加入受检者红细胞适量及相应所需3%~5％A型、B型试剂红细胞(自制或商品化试剂)并搅匀。
（4）轻轻旋转摇晃混匀，直到形成均匀的细胞悬液或凝集块，边摇边观察。 （5）3分钟以上记录结果。记录观察到的凝集程度或溶血程度. 4。制备反定红细胞的操作步骤
（1)分别取3～5人份已知A、B血型的红细胞，同型混合后用生理盐水,洗涤、离心(前2次在1 760g条件下,离心3分钟，第3次在1 760g条件下，离心5分钟)3次,去上清制备成压积红细胞。
（2）用生理盐水配成浓度为5％的试剂红细胞：9。5ml生理盐水加0.5ml压积红细胞。
(3)配置好的红细胞悬液应使用抗A、抗B标准血清进行血型鉴定,A细胞与抗A、B细胞与抗B均应出现4+强度的凝集.
(4)保存条件：配制好的5％的红细胞悬液在试管上注明红细胞血型及配制时间，2～8℃避光保存，有效期24小时.
（5）将用于制备反定红细胞的供者信息及血型复核结果记录在《反定试剂红细胞制备登记表》上。
5。WADiana全自动ABO及RhD血型鉴定 参照《WADiana全自动血型配血系统标准操作规程》进行。
6.SWING—SAXO系统ABO及RhD血型鉴定 参照《SWING-SAXO血型配血系统标准操作规程》进行。
7。Techno全自动血型／配血系统ABO及RhD血型鉴定 参照《Techno全自动血型配血系统标准操作规程》进行。
8。Othro AutoVue lnnova全自动ABO及RhD血型鉴定 参照《Othro
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AutoVuelnnova全自动血型配血系统标准操作规程》进行. 9。检验结果的输入与确认
（1）启动“检验程序”，输入用户名及口令后,进入检验程序。
（2)非传输结果及镜检结果的输入：单击“检验”菜单,选择“检验结果录入／修改”，通过申请序号进行检验结果的录入及修改.
（3）检验结果的确认:检验结果应由实验室负责人或授权人员进行确认，方法为单击“结果处理”菜单，选择“报告确认”进入结果确认，通过选择“工作单元\"“报告日期”“单张”或“批量\"后，按“提取\"键提取已经传输或录入的检验结果，经两人核对无误后按“确认”键进行确认. （九)质量控制 1.室内质量控制
（1）手工试管法、玻片法或纸板法：每日（或当日更换试剂包装时）进行试剂质控，具体操作参照《输血相容性检测室内质量控制管理制度》进行。 (2）全自动微柱凝胶或微柱玻璃珠法：每日(或当日更换试剂批号时）进行过程质控,具体操作参照《输血相容性检测室内质量控制管理制度》进行. 2。室间质量评价 参加卫生部临检中心组织的全国输血相容性检测室间质量评价活动。 （十）干扰因素
1.严重的黄疸或脂血使全自动血型检测系统出现反定型假阳性。
2。冷凝集素或异常球蛋白增高会使红细胞出现异常凝集，从而影响正定型和(或）反定型结果，出现假阳性结果。
3。受检者使用羟乙基淀粉、右旋糖酐等药物时可能会使细胞出现假凝集,干扰正反定型结果。
（十一）结果计算及测量不确定度 不适用。
(十二)生物参考区间
1。ABO血型鉴定 A、B、O、AB型。 2.RhD血型鉴定 阴性或阳性。 (十三)检验结果可报告区间
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1.ABO血型鉴定 A、B、O、AB型. 2.RhD血型鉴定 阴性或阳性。 （十四）警告／危急值
受检者出现亚型或因产生不规则抗体干扰血型鉴定可能影响常规输血时，应及时通知临床医生，必要时通知患者或家属。 (十五）实验室解释
出现亚型结果时应遵守相应的输血原则。 (十六)安全性预警措施
1。实验室及工作人员一般安全防护措施参见《实验室安全与卫生管理制度》。 2。发生血液标本溢出时,应参照《实验室消毒与清洁管理制度》对污染的环境进行消毒处理。
3。操作人员发生职业暴露时，应参照《实验室职业暴露预防与处置管理制度》及时进行相应处理。
4.在仪器运转过程中，勿触及样品针、移动的传输装置等，避免造成人身伤害。禁止触摸仪器密封面板内的电路,防止造成电击损伤. 5.对突发传染性疾病的血液标本应启动特殊的安全防护程序. (十七）变异潜在来源
1.出生6个月以内新生儿，体内可能尚无ABO血型抗体产生，血型以正定型为准。
2.老年患者、急性白血病患者、肿瘤患者可能出现血型抗原减弱而影响正定型结果。
3。ABO亚型会影响正常结果的判读，出现正定型减弱或出现假阴性，导致正反定型不一致。
(十八)ABO及RhD血型鉴定试验特别 注意事项
1。正反定型不一致的标本一律使用试管法重复试验。
2.正定型弱于3+，一律用试管法重复试验，并根据情况加做其他试验. 3.玻片法、纸板法试验要注意结果观察时间,即不能过短，因反应不充分出现假阴性,也不能过长(一般不超过5分钟)，因水分蒸发造成红细胞假凝集。
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4。本实验室自制试剂红细胞需经标准血清正定型鉴定无误后方可使用。 5.试剂红细胞需将3个以上健康供者同型新鲜红细胞混合,用生理盐水充分洗涤3次，以除去存在于血清中的抗体、蛋白成分及可溶性抗原。 6。所有全自动方法的注意事项分别参照各检测系统的标准操作规程。 (十九)报告时间
ABO及RhD血型鉴定于当日下午17时前出结果并上传HIS，住院患者的检验报告单由卫生员于次日上午发回申请单所在的临床科室，门诊患者次日下午于门诊楼一层挂号大厅化验单领取处取检验报告单。 （二十）相关文件
1。WADiana全自动血型配血系统、SWING-SAXO血型配血系统、Techno全自动血型配血系统、Othro AutoVue lnnova全自动血型配血系统、抗A／B标准血清、抗D标准血清、反·定试剂红细胞使用说明书。
2.临床输血技术规范。北京：中华人民共和国卫生部医政司(2000)。 3。中国输血技术操作规程（血站部分). 天津:中华人民共和国卫生部医政司(1997).
二、不规则抗体筛查标准操作规程
（一）检验目的
检测受血者、孕妇等血清中是否存在抗A、抗B以外的不规则抗体，为交叉配血、ABO血型正确定型（不规则抗体干扰反定型）以及新生儿溶血病产前、产后诊断提供参考依据. (二）检验原理
1.盐水介质法 IgM类不规则抗体可以在室温盐水介质中发生凝集反应，使用手工试管法就可以判断受检者血液中是否存在IgM类不规则抗体。
2.凝聚胺法 利用多聚季胺盐类——凝聚胺携带很多正电荷，可以中和红细胞表面的负电荷，使红细胞之间距离减少，引起正常红细胞可逆性凝集。无抗体致敏的红细胞被凝聚胺凝集，当加入中和液后，则凝集消散，而被不规则抗体致敏的红细胞被凝聚胺凝集，则不能消散,以此来判断受检者血液中是否存在不规则抗体。
3。微柱凝胶法 微柱凝胶卡的微管中装填有葡聚糖凝胶颗粒和抗人球蛋白
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试剂，红细胞表面抗原与其对应的IgG抗体结合以后,在离心力的作用下不断向管底沉降，并与抗人球蛋白结合形成红细胞凝集，凝胶颗粒具有分子筛的作用，可以阻滞凝集的红细胞在离心力的作用下通过凝胶颗粒，使其悬浮在凝胶上端，未凝集的红细胞则可以通过凝胶颗粒到达微管底部。
4.玻璃珠微柱法 微柱卡的每一个微管中装填有直径均一的玻璃微珠和抗人球蛋白试剂（抗—IgG和抗补体C3），红细胞表面抗原与其对应的IgG抗体结合以后，在离心力的作用下不断向管底沉降,并与抗人球蛋白结合形成红细胞凝集,玻璃微珠具有分子筛的作用，可以阻滞凝集的红细胞在离心力的作用下通过玻璃微珠，使其悬浮在玻璃微珠层的上端，而未凝集的红细胞则可以通过玻璃微珠之间的微小空隙到达微管底部。 （三)适用范围
适用于手工凝聚胺法、手工微柱凝胶法、手工玻璃珠微柱法、全自动微柱凝胶法、全自动玻璃珠微柱法不规则抗体筛查及鉴定试验。 (四）设备性能参数
各种用于不规则抗体筛查试验的检测系统性能指标参见相应说明书。 （五)器材与试剂
1。器材 KA—2200血清学专用离心机、B600-A型低速离心机、WADiana全自动血型配血系统、SWING-SAXO血型配血系统、Techno全自动血型配血系统、Othro Au-toVuelnnova全自动血型配血系统、阅片灯箱、卡式专用离心机、孵育器、塑料软试管、塑料硬质试管(75mm×l2mm)、试管架、一次性塑料滴管、记号笔、移液器、一次性移液枪头.
2。试剂 Diana DG Gel Coombs卡、DiaMed Coombs卡、Othro BioVue Coombs卡、生理盐水、凝聚胺配套试剂(LIM液、Re-suspending液、Polybrene液）专用稀释液(DII。2、DG GEL sol或BLISS液）、3系3％抗筛细胞、3系1%抗筛细胞、10系或16系1％鉴定谱细胞（可由3％鉴定谱细胞经专用稀释液稀释获得）。 (六）样本要求
EDTA—K2或EDTA—K3：抗凝静脉血≥3ml,经B600-A型离心机在1 760g条件下，离心5分钟，离心后无溶血及明显乳糜。紧急情况下可以使用抗凝动脉
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血。
(七)校准步骤
各类全自动血型检测系统的校准操作过程分别见《WADiana全自动血型配血系统标准操作规程胍SWING—SAXO血型配血系统标准操作规程》《Techno全自动血型配血系统标准操作规程》《Othro AutoVue lnnova全自动血型配血系统标准操作规程》。 (八)操作程序
1.盐水介质法不规则抗体筛查及鉴定操作程序
(1)取4支洁净硬质试管分别做好标记I、Ⅱ、Ⅲ、自身对照.
(2）每支试管中分别加入患者血浆(或血清)2滴，再加入相应3％I、Ⅱ、Ⅲ号筛选细胞和自身红细胞各1滴并混匀。
（3）使用血清学专用离心机在1 000g条件下离心15秒.
（4)结果判定：一系或多系红细胞发生凝集，自身对照不凝集的判断为阳性，提示存在IgM类不规则抗体。
2。手工凝聚胺法不规则抗体筛查及鉴定操作程序 （1)取3支洁净硬质试管分别做好标记I、Ⅱ、Ⅲ。
（2)每支试管中分别加入患者血浆(或血清)2滴，再加入相应3％I、Ⅱ、Ⅲ号筛选细胞1滴并混匀.
（3）在每支试管中加入低离子液(LIM)0.65ml及聚凝胺(Polybrene）试剂2滴混匀，血清学专用离心机在1 000g条件下，离心15秒。
（4）离心后弃上清，不要沥干,观察细胞扣，轻轻振摇,如果有凝集现象则加入重悬液2滴，拖拉辗转，1分钟内观察结果：3管中任意1管或多管出现凝集者为抗体筛选阳性，应进一步使用10系或16系谱细胞鉴定抗体的特异性，操作方法与筛查试验相同，同时应加自身对照管，以判断自身抗体同时存在的可能性。3管均无凝集为阴性。
3.手工微柱凝胶法不规则抗体筛查及鉴定操作程序
（1）按试验所需取相应张数(反应孔数)的凝胶Coombs卡（Diana／DiaMed），撕掉卡上的封口锡纸,剩余孔保留锡纸,在反应孔的下方分别标明患者姓名和筛查细胞系别。
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（2）先将3系1%抗筛细胞各50µ1分别加入相应的反应孔中，再将患者血清(或血浆)25µl依次加入相应反应孔内.
（3)加样完毕，重新将锡纸盖好，将凝胶卡放入卡架中,连同卡架一起放入专用的孵育器37℃孵育15分钟。
（4)放入配套的专用离心机,按要求离心10分钟。
（5)目测并记录结果，任何一系或多系细胞出现阳性结果，抗筛结果即为阳性，应转入抗体鉴定试验.
（6）使用10系或16系1％鉴定谱细胞进行抗体特异性鉴定，操作步骤与抗体筛查相似，只是细胞谱由3系增加到10系或16系，同时需要增加自身对照孔,以判断自身抗体同时存在的可能性。
4.手工玻璃珠微柱法不规则抗体筛查及鉴定操作程序
(1)按实验所需取相应张数（反应孔数）的玻璃珠微柱Coombs卡,撕掉卡上的封口锡纸，剩余孔保留锡纸，在反应孔的下方分别标明患者姓名和筛查细胞系别。
(2)先向每个反应柱内加入50µ1 BILSS液,再分别向反应柱内加入10µl 3％I、Ⅱ、Ⅲ号抗筛红细胞。最后向反应柱内加入40µl患者血清或血浆。注意，加样时，枪头请勿触及微柱管壁。观察柱中的反应物各组分是否混匀,必要时轻弹几下微柱充分，使反应物混匀.
（3）加样完毕，重新将锡纸盖好,将玻璃珠微柱卡放入卡架中，连同卡架一起放入专用的孵育器37℃孵育15分钟。
（4)Biovue离心机离心5分钟，离心必须在加样后30分钟内进行。 (5）目测并记录结果，任何一系或多系细胞出现阳性结果，抗筛结果即为阳性,应转入不规则抗体鉴定试验。
(6）使用10系或16系1％谱细胞进行抗体特异性鉴定，操作步骤与抗体筛查相似，只是细胞谱由3系增加到10系或16系,同时需要增加自身对照孔，以判断自身抗体同时存在的可能性。
5.WADiana全自动不规则抗体筛查操作程序 参照《WADiana全自动血型配血系统标准操作规程》进行.
6。SWING-SAXO系统不规则抗体筛查操作程序参照《SWING-SAXO血型
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配血系统标准操作规程》进行.
7。Techno全自动血型／配血系统不规则抗体筛查操作程序 参照《Techno全自动血型配血系统标准操作规程》进行。
8.Othro AutoVue lnnova全自动不规则抗体筛查操作程序 参照《Othro Au—toVuelnnova全自动血型配血系统标准操作规程》进行。 9.检验结果的输入与确认
（1)启动“检验程序”，输入用户名及口令后，进入检验程序。
（2）非传输结果及镜检结果的‘输入：单击“检验”菜单,选择“检验结果录入／修改”，通过申请序号或ID号进行检验结果的录入及修改。
(3）检验结果的确认：检验结果应由实验室负责人或授权人员进行确认，方法为单击“结果处理\"菜单,选择“报告确认”进入结果确认，通过选择“工作单元”“报告日期”“单张”或“批量”后，按“提取”键提取已经传输或录入的检验结果,经两人核对无误后按“确认”键进行确认. (九）质量控制 1。室内质量控制
(1)凝聚胺试剂：每日(或当日更换试剂包装时）进行试剂质控，具体操作参照《输血相容性检测室内质量控制管理制度》进行。
(2）手工抗人球蛋白试剂：每日（或当日更换试剂批号时)进行过程质控，具体操作参照《输血相容性检测室内质量控制管理制度》进行。
(3)手工及全自动卡式抗人球法:每日（或当日更换试剂批号时)进行过程质控，具体操作参照《输血相容性检测室内质量控制管理制度》进行。
2。室间质量评价 参加卫生部临检中心组织的全国输血相容性检测室间质量评价活动。 （十)干扰因素
1。严重的黄疽、溶血或脂血使全自动血型检测系统判读结果时出现假阳性。 2。冷凝集素或异常球蛋白增高会使红细胞出现异常凝集，出现假阳性结果. (十一)结果计算及测量不确定度 不适用。
(十二）生物参考区间
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阴性。
(十三）检验结果可报告区间 阴性或阳性。 （十四)警告／危急值
不规则抗体筛查结果阳性，条件具备时应进行抗体鉴定，而后应立即进行配血筛查,寻找合适的供者。如果找不到合适的供者，应及时通知临床医生(手术患者应停止手术或手术延期)；如果找到合适的供者，需要和临床医生确认申请量是否足够，是否需要追加申请量. (十五)实验室解释
不规则抗体筛查试验结果阳性可能是由于既往输血、妊娠原因导致,也有部分不规则抗体在无明确抗原刺激条件下自然产生.阳性结果可能会造成配血困难，提高新生儿溶血病的发生概率。 （十六）安全性预警措施
1。实验室及工作人员一般安全防护措施参见《实验室安全与卫生管理制度》。 2.发生血液标本溢出时,应参照《实验室消毒与清洁管理制度》对污染的环境进行消毒处理.
3.操作人员发生职业暴露时,应参照《实验室职业暴露预防与处置管理制度》及时进行相应处理.
4.在仪器运转过程中，勿触及样品针、移动的传输装置等,避免造成人身伤害.禁止触摸仪器密封面板内的电路，防止造成电击损伤。
5。对突发传染性疾病的血液标本应启动特殊的安全防护程序。 （十七）变异潜在来源
产生不规则抗体的患者多数由于后天免疫造成,一般都有输血史或妊娠史，少数人也会产生天然抗体.
（十八)不规则抗体筛查试验特别注意事项 1。凝聚胺法
（1)离心后,倒掉上清，不要沥干，让管底残留约0.1ml液体。
（2)按照加样顺序进行结果观察，确保每一个反应结果都能在1分钟内观察，否则弱凝集散开会出现假阴性。
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（3）凝聚胺法可能造成某些低效价或低反应活性的IgG类不规则抗体漏检。 2.手工微柱凝胶法
(1）凝胶卡手工加样顺序:先加红细胞悬液，后加血清或血浆，红细胞均为o。8％~1％的反应浓度。
（2）稀释液要室温平衡15分钟以上。
3.全自动卡式不规则抗体筛查 参照各仪器标准操作规程中约定的注意事项。
4.微柱（凝胶、玻璃珠）抗人球法 此类方法因在37℃条件下检测可能造成某些低效价IgM不规则抗体漏检，但此类抗体在37℃时多无反应活性或反应活性低而无临床意义。当怀疑漏检的不规则抗体影响血型鉴定或交叉配血时，应增加盐水介质不规则抗体筛查和(或)抗体鉴定试验，发现并确定抗体的特异性,以消除其对血型鉴定或交叉配血的干扰。 （十九）报告时间
不规则抗体筛查试验于当日17：00前出结果并上传HIS，住院患者的检验报告单由卫生员于次日上午发回申请单所在的临床科室，门诊患者次日下午于门诊楼一层挂号大厅化验单领取处取检验报告单。 (二十)相关文件
1.WADiana全自动血型配血系统、SWING-SAXO血型配血系统、Techno全自动血型配血系统、Othro AutoVue lnnova全自动血型配血系统、抗筛细胞及凝聚胺试剂使用说明书.
2.临床输血技术规范.北京:中华人民共和国卫生部医政司（2000)。 3。中国输血技术操作规程（血站部分）天津：中华人民共和国卫生部医政司（1997)。
三、交叉配血标准操作规程
(一）检验目的
检测供血者与受血者之间的输血相容性,包括主侧配血与次侧配血,确保输血安全。
(二)检验原理
1。凝聚胺法 利用多聚季胺盐类——凝聚胺携带很多正电荷,中和红细胞表
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面的负电荷,使红细胞之间距离减少，引起正常红细胞可逆性凝集。无抗体致敏的红细胞被凝聚胺凝集，当加入中和液后，则凝集消散，而抗体致敏的红细胞被凝聚胺凝集，则不能消散，以此来判断供、受者间血液的相容性。
2.微柱凝胶法 微柱凝胶卡的微管中装填有葡聚糖凝胶颗粒和抗人球蛋白试剂,红细胞表面抗原与其对应的IgG抗体结合以后，在离心力的作用下不断向管底沉降,并与抗人球蛋白结合形成红细胞凝集，凝胶颗粒具有分子筛的作用，可以阻滞凝集的红细胞在离心力的作用下通过凝胶颗粒,使其悬浮在凝胶上端，未凝集的红细胞则可以通过凝胶颗粒到达微管底部。
3.玻璃珠微柱法 微柱卡的每一个微管中装填有直径均一的玻璃微珠和抗人球蛋白试剂（抗-IgG和抗补体C3)，红细胞表面抗原与其对应的IgG抗体结合以后,在离心力的作用下不断向管底沉降，并与抗人球蛋白结合形成红细胞凝集,玻璃微珠具有分子筛的作用,可以阻滞凝集的红细胞在离心力的作用下通过玻璃微珠，使其悬浮在玻璃微珠层的上端,未凝集的红细胞则可以通过玻璃微珠之间的微小空隙到达微管底部。 (三）适用范围
适用于手工凝聚胺法、全自动微柱凝胶法、全自动玻璃珠微柱法交叉配血试验。
（四)设备性能参数
各种交叉配血检测系统性能指标参见相应检测系统说明书. （五)器材与试剂
1.器材 KA—2200血清学专用离心机、B600—A型低速离心机、WADiana全自动血型配血系统、SWING-SAXO血型配血系统、Techno全自动血型配血系统、Othro Au-toVuelnnova全自动血型及配血系统、阅片灯箱、光学显微镜、塑料软试管、塑料硬质试管（100mm×l2mm和75mm×l2mm）、试管架、一次性塑料滴管、记号笔.
2。试剂 DianaDGGelCoombs卡、DlaMed Coombs卡、Othro BioVue Coombs卡、生理盐水、凝聚胺配套试剂（LIM液、Re-suspending液、Polybrene液）、专用稀释液(DIL2、DGGELsol或BLISS液)。 （六）标本要求
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1。患者样本 EDTA—K2或EDTA—K3抗凝全血，全血量3～5ml，在1 760g条件下，离心5分钟,离心后无溶血、无凝块、无明显乳糜。紧急情况下可以使用抗凝动脉血。
2。供者标本 枸橼酸盐抗凝全血,全血量3-5ml，在1 760g条件下，离心5分钟,离心后无溶血、无凝块及明显乳糜。 (七）校准步骤
各类全自动血型检测系统的校准操作过程分别见《WADiana全自动血型配血系统标准操作规程》《SWING-SAXO血型配血系统标准操作规程》《Techno全自动血型配血系统标准操作规程》《强生Othro AutoVue ln—nova全自动血型配血系统标准操作规程》. （八）操作程序
1。凝聚胺法交叉配血操作程序
（1）取洁净硬质试管2支,标明主、次侧，主侧管加入受血者血清（血浆)2滴，供血者3％红细胞悬液(洗涤或不洗涤均可)1滴，次侧管加供血者血清2滴,受血者3％红细胞悬液(洗涤或不洗涤均可)1滴.
（2)各试管分别加LIM液0。65ml，充分混合均匀后，再各加Polybrene溶液2滴，并混合均匀。
(3)使用血型血清学专用离心机在1 000g条件下,离心15秒，把上清液倒掉，不要沥干，让管底残留约0.1ml液体.
（4）轻轻摇动试管,目测红细胞有无凝集，如无凝集,则必须重做以上步骤。 （5)最后加入Resuspending液2滴，轻轻转动试管并同时观察结果。如果在30秒至1分钟凝集散开，代表是由Polybrene引起的非特异性聚集，配血结果相合；如凝集不散开，则为红细胞抗原抗体结合的特异性反应，配血结果不相合。如反应可疑，可进一步将细胞悬液涂在玻片上用显微镜观察。
2。AutoVue lnnova全自动交又配血操作程序 参照《Othro AutoVue lnnova全自动血型配血系统标准操作规程》进行。 3。检验结果的输入与确认
(1）启动“检验程序”，输入用户名及口令后，进入检验程序.
(2)非传输结果及镜检结果的输入：单击“检验\"菜单，选择“检验结果录入／
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修改”，通过申请序号进行检验结果的录入及修改。
（3)检验结果的确认：检验结果应由实验室负责人或授权人员进行确认，方法为单击“结果处理”菜单,选择“报告确认”进入结果确认，通过选择“工作单元\"“报告日期”“单张”或“批量”后,按“提取\"键提取已经传输或录入的检验结果，经两人核对无误后按“确认”键进行确认。 (九）质量控制 1。室内质量控制
（1)凝聚胺试剂质控：每日（或当日更换试剂包装时)进行试剂质控，具体操作参照《输血相容性检测室内质量控制管理制度》进行。
(2）全自动卡式抗人球法质控:每日(或当日更换试剂批号时）进行过程质控，具体操作参照《输血相容性检测室内质量控制管理制度》进行。
2。室间质量评价 参加卫生部临检中心组织的全国输血相容性检测室间质量评价活动。 (十)干扰因素
1。严重的黄疸、溶血或脂血使全自动血型检测系统判读结果时出现假阳性。 2.冷凝集素或异常球蛋白增高会使红细胞出现异常凝集，手工交叉配血时主侧和(或）次侧出现假阳性结果。
(十一)结果计算及测量不确定度 不适用。
(十二）生物参考区间 不适用.
(十三)检验结果可报告区间 相合或不相合. (十四）警告／危急值
发现交叉配血不合时要尽可能查明原因，必要时进行多样本配血筛查，寻找合适的供者。如果找不到合适的供者，应及时通知临床医生（手术患者应停止手术或手术延期)；如果找到合适的供者,需要和临床医生确认申请量是否足够，是否需要追加申请量. (十五）实验室解释
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交叉配血结果不相合一般由同种不规则抗体、自身抗体、异常蛋白干扰或供受者之间血型不同等原因所致。 (十六）安全性预警措施
1。实验室及工作人员一般安全防护措施参见《实验室安全与卫生管理制度》。 2.发生血液标本溢出时，应参照《实验室消毒与清洁管理制度》对污染的环境进行消毒处理.
3.操作人员发生职业暴露时，应参照《实验室职业暴露预防与处置管理制度》及时进行相应处理。
4。在仪器运转过程中，勿触及样品针、移动的传输装置等,避免造成人身伤害.禁止触摸仪器密封面板内的电路，防止造成电击损伤.
5.对突发传染性疾病的血液标本应启动特殊的安全防护程序。 （十七)变异潜在来源
不规则抗体、自身抗体、冷凝集等都可以导致主侧和(或)次侧交叉配血不合.产生不规则抗体的患者多数由于后天免疫造成,一般都有输血史或妊娠史，少数人也会产生天然抗体。
(十八)交叉配血试验特别注意事项 1。凝聚胺法
（1）离心后,倒掉上清液,不要沥干，让管底残留约0。1ml液体。 (2)按照加样顺序进行结果观察,确保每一个反应结果都能在1分钟内观察，否则弱凝集散开会出现假阴性.
2。全自动卡式配血试验 参照各仪器标准操作规程中约定的注意事项。 (十九）报告时间
急诊交叉配血试验于输血科收到申请单后40分钟、绿色通道患者于输血科收到申请单后20分钟、普通治疗和手术备血患者于申请用血时间之前出结果并上传HIS。
（二十)相关文件
1。 OthroAutoVuelnnova全自动血型配血系统、凝聚胺试剂使用说明书。 2.临床输血技术规范。北京：中华人民共和国卫生部医政司(2000)。 3.中国输血技术操作规程（血站部分）。天津：中华人民共和国卫生部医政
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司(1997)。
四、手工抗人球蛋白试验(试管法）标准操作规程
（一)检验目的
建立手工抗人球蛋白试验的标准操作规程，确保手工抗人球蛋白试验的规范性和准确性。 （二）检验原理
血液中一些IgG类抗体或补体C。（主要是免疫性抗体）与红细胞表面相应抗原结合后，在盐水介质中不出现肉眼可见的凝集反应，但在加入抗IgG或抗C，抗体后，以其搭桥则出现凝集反应，该试验称之为抗人球蛋白试验，也称Coombs Test。包括直接抗人球蛋白试验（DAT）和间接抗人球蛋白试验(1AT)。
(三)适用范围
1。DAT用于检测红细胞体内致敏情况 （1）新生儿溶血病的诊断。 (2)免疫性溶血性贫血的诊断。 (3)研究药物致敏的红细胞。 （4)溶血性输血反应的研究。 2.IAT用于检测体外致敏红细胞的抗体 (1）IgG类不规则抗体筛查与鉴定. （2)交叉配血试验。
（3）检查用其他方法不能查明的红细胞抗原。
(4)用于一些特殊研究，如混合凝集反应、白细胞抗体及血小板抗体检测试验。
（四）设备性能参数
参见血清学专用离心机使用说明书。 （五)器材与试剂
1.器材 离心机、塑料软试管、塑料硬质试管(75mm×12mm）、试管架、一次性塑料滴管、记号笔。
2.试剂 生理盐水、抗球蛋白试剂（市售单克隆抗IgG、单克隆抗C3d、抗IgG+C3d)、致敏的阳性对照细胞(自制）。
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（六)样本要求
1。患者标本 EDTA-K3或EDTA—K2抗凝全血≥3m1，经B600—A型离心机在1 760g条件下，离心5分钟，离心后无溶血及明显乳糜。紧急情况下可以使用抗凝动脉血。
2.供者标本 枸橼酸盐抗凝,全血量3-5ml,经B600-A型离心机在1 760g条件下，离心5分钟，离心后无溶血、无凝块及明显乳糜。 （七）校准步骤
参照血清学专用离心机使用说明书中的校准要求执行。 （八)操作程序
1。直接抗人球蛋白试验
(1）取2支洁净试管分别加入抗IgG+C3d（可根据需要使用多特异性抗球蛋白)1滴，其中1支试管加1滴受检者3次洗涤后的3％~5％红细胞盐水悬液，另1支试管加2滴正常人AB型血清和1滴3％～5％正常人O型红细胞悬液作为阴性对照，分别混匀。
（2）使用血型血清学专用离心机在1 000g条件下，离心15秒,观察、记录结果。若离心后受检管出现红细胞凝集,同时阴性对照管无凝集，可确定为阳性结果。对于阳性结果可以根据实际需要分别使用抗IgG、抗C3d区分其特异性。若受检标本管中无红细胞凝集（阴性)，则室温孵育5分钟,在离心观察结果，如为阳性则为抗补体反应结果.2次离心均为阴性结果的，在受检管中再加1滴3％～5％IgG致敏细胞的标准O型红细胞悬液,2次离心后观察结果，若出现凝集表明为阴性结果可靠. 2。间接抗人球蛋白试验 （1)按表14-1加入试剂.
（2）混匀，使用血型血清学专用离心机在1 000g条件下，离心15秒,观察、记录结果,阳性对照管凝集,阴性对照管不凝集则受检管出现凝集为阳性,不凝集为阴性。
3.IgG致敏对照试剂红细胞的制备
(1）取3人份混合的O型RhD阳性红细胞，生理盐水洗涤3次后制成压积红细胞。
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（2)在压积红细胞中按每毫升4～6滴的比例添加IgG抗D血清,混匀后37℃孵育15分钟。
（3)生理盐水洗涤4-6次后制成5％红细胞悬液，24小时内使用。 4。检验结果的输入与确认
(1)启动“检验程序”，输入用户名及口令后，进入检验程序.
(2)单击“检验\"菜单,选择“检验结果录入／修改”，通过申请序号进行检验结果的录入及修改。
（3)检验结果的确认：检验结果应由实验室负责人或授权人员进行确认,方法为单击“结果处理\"菜单，选择“报告确认”进入结果确认，通过选择“工作单元”“报告日期”“单张\"或“批量”后,按“提取”键提取已经传输或录入的检验结果，经两人核对无误后按“确认\"键进行确认。 （九)质量控制
1。室内质量控制 抗人球蛋白试剂：每日(或使用时)进行试剂质控，具体操作参照《输血相容性检测室内质量控制管理制度》进行。
2.室间质量评价 参加卫生部临检中心组织的全国输血相容性检测室间质量评价活动,可以使用手工抗人球蛋白试验进行交叉配血。 （十）干扰因素
1.过度离心会出现假阳性结果。
2。冷凝集素或异常球蛋白增高会使红细胞出现异常凝集,造成假阳性结果. 3.间接抗人球蛋白试验中洗涤不充分可能造成假阴性。 （十一)结果计算及测量不确定度 不适用。
（十二)生物参考区间 不适用。
(十三）检验结果可报告区间 阴性或阳性.
(十四）警告／危急值
直接抗人球蛋白试验结果阳性可能提示红细胞被致敏，可以为自身免疫性疾病、溶血性疾病以及溶血性输血反应的诊断提供依据,必要时应及时提示临床医
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生。间接抗人球蛋白试验阳性,可能提示不规则抗体的存在或配血不合，需要提醒临床医生，调整或重新制定输血或备血方案. （十五)实验室解释
直接抗人球蛋白试验结果可以为自身免疫性疾病、溶血性疾病以及溶血性输血反应的诊断提供依据。间接抗人球蛋白试验阳性，可能提示不规则抗体的存在或配血不合。
(十六）安全性预警措施
1。实验室及工作人员一般安全防护措施参见《实验室安全与卫生管理制度。 2。发生血液标本溢出时，应参照《实验室消毒与清洁管理制度》对污染的环境进行消毒处理.
3.操作人员发生职业暴露时，应参照《实验室职业暴露预防与处置管理制度》及时进行相应处理。
4.在仪器运转过程中,勿触及样品针、移动的传输装置等,避免造成人身伤害。禁止触摸仪器密封面板内的电路,防止造成电击损伤.
5。对突发传染性疾病的血液标本应启动特殊的安全防护程序。
(十七)变异潜在来源 不适用.
(十八）手工抗人球蛋白试验特别注意事项
1。抗球蛋白试验使用的血液标本一定要用含EDTA抗凝管采集，以避免红细胞在体外被补体致敏,出现假阳性。
2.使用EDTA抗凝管采集的标本，在做间接抗人球蛋白试验的时候,用的是血浆代替血清，可能使一些少见的抗体漏检。 (十九）报告时间
手工抗人球蛋白方法可以应用在不同试验中，一般于检测当日下午17时前出结果并上传HIS，住院患者的检验报告单由卫生员于次日上午发回申请单所在的临床科室，门诊患者次日于门诊楼一层挂号大厅化验单领取处取检验报告单。 （二十）相关文件
1.抗人球蛋白试剂使用说明书。
2.临床输血技术规范。北京:中华人民共和国卫生部医政司(2000）。
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3。中国输血技术操作规程(血站部分). 天津：中华人民共和国卫生部医政司(1997）.
五、Rh血型分型（试管法）试验标准操作规程
（一)检验目的
检测红细胞表面Rh血型系统C、c、D、E、e抗原表达情况，为输血相容性检测、Rh系统新生儿溶血病的诊断与预防等提供参考依据。 （二)检验原理
Rh血型系统单克隆IgM类血型抗体可以使具有相应抗原的红细胞在盐水介质中发生肉眼可见的凝集,利用单克隆IgM血型抗体可以鉴定出红细胞表面的Rh抗原。
(三）适用范围
适用于受检者（受者、供者）红细胞表面C、c、D、E、e抗原鉴定试验。 (四)设备性能参数
参见血清学专用离心机使用说明书。 （五）器材与试剂
1。器材 离心机、塑料软试管、塑料硬质试管(75mm×l2mm)、试管架、一次性塑料滴管、记号笔。
2。试剂 生理盐水、市售单克隆IgM抗C、抗c、抗D、抗E、抗e及IgM+IgG抗D标准血清.IgM抗D用于临床样本（受者)RhD血型的常规检测，不能与DIV细胞反应,不能检测出弱D。IgM+IgG用于供者样本RhD血型的常规检测及确证试验，能与DIV细胞反应,检测出弱D抗原。10系或16系谱细胞用于阴阳性对照.
(六)样本要求
1.患者样本 EDTA-K2；或EDTA-K3抗凝全血≥3ml，经B600—A型离心机在1 760g条件下，离心5分钟,离心后无溶血、无凝块及明显乳糜。
2.供者标本 枸橼酸盐抗凝，全血量≥3ml，经B600-A型离心机在1 760g条件下，离心5分钟，离心后无溶血、无凝块及明显乳糜。 （七）校准步骤
参照KA—2200血清学专用离心机、B600—A型低速离心机使用说明书中的
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校准要求执行。 （八)操作程序
1.悬浮红细胞的配制 取受检者适量红细胞,经生理盐水洗涤3次,取压积红细胞配成3％～5％的红细胞盐水悬液。
2.加样 取4支洁净硬质试管，分别标记为受检者、阴性对照、阳性对照、自身对照，前3支试管内分别加入抗C（或抗c、或抗D、或抗E、或抗e）各1滴，第4支加自身血清（或血浆）2滴，在每支试管中再加配制好待用的3％～5％受检者红细胞悬液1滴,混匀。
3.离心 血型血清学专用离心机在1 000g条件下，离心15秒。
4.结果判断 将试管拿成锐角，缓慢倾斜,使液体反复冲刷细胞扣，当细胞不再附着在试管上时，继续缓慢地倾斜和振摇,直到形成均匀的细胞悬液或凝集块。如受检管凝集、阳性对照管凝集、阴性对照管不凝集、自身对照为阴性，即表示C（或c、或D、或E、或e）抗原阳性；受检管不凝集、阳性对照管凝集、阴性对照管不凝集、自身对照为阴性即表示C(或c、或D、或E、或e）抗原阴性。当出现阳性对照管不凝集和（或)阴性对照管凝集时，需要更换试剂重复试验。 5。检验结果的输入与确认
(1）启动“检验程序”,输入用户名及口令后,进入检验程序。
（2)单击“检验”菜单,选择“检验结果录入／修改”,通过申请序号进行检验结果的录入及修改。
(3）检验结果的确认：检验结果应由实验室负责人或授权人员进行确认，方法为单击“结果处理”菜单，选择“报告确认”进人结果确认,通过选择“工作单元”“报告日期（\"“单张”或“批量”后，按“提取”键提取已经传输或录入的检验结果，经两人核对无误后按“确认”键进行确认. （九）质量控制
1。室内质量控制 通过增加阳性对照、阴性对照和自身对照实现室内质量控制。
2。室间质量评价 目前只有RhD抗原可以参加卫生部临检中心组织的全国输血相容性检测室间质量评价活动,C、c、E、e抗原检测尚无统一的室间质量评价活动可以参力口.
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(十)干扰因素
1。离心条件影响试验结果，最好使用血清学专用离心机，以防假阳性或假阴性结果出现。
2。当用未经洗涤的细胞做试验时,样本中的自身凝集和异常蛋白质可能引起假阳性结果。
（十一)结果计算及测量不确定度 不适用。
（十二)生物参考区间 不适用。
(十三）检验结果可报告区间 阳性或阴性. (十四)警告／危急值
1。—D—患者输注含有C、E、c、e抗原的红细胞，可能会诱发产生抗C、或抗E、或抗c、或抗e抗体。
2.Rhnull型患者输注含有D、C、E、c、e抗原的红细胞，可能会诱发产生抗D、或抗C、或抗E、或抗c、或抗e抗体,造成再次输血时配血困难。 (十五）实验室解释
RhD阴性供者应进一步进行确证试验。 (十六）安全性预警措施
1.实验室及工作人员一般安全防护措施参见《实验室安全与卫生管理制度》. 2。发生血液标本溢出时，应参照《实验室消毒与清洁管理制度》对污染的环境进行消毒处理。
3。操作人员发生职业暴露时，应参照《实验室职业暴露预防与处置管理制度》及时进行相应处理。
4。在仪器运转过程中，勿触及样品针、移动的传输装置等，避免造成人身伤害。禁止触摸仪器密封面板内的电路,防止造成电击损伤。 5.对突发传染性疾病的血液标本应启动特殊的安全防护程序。 （十七)变异潜在来源
1。D变异体，包括弱D、部分D、放散型D等,都会表现为D抗原减弱。
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2.-D／—D—遗传基因型红细胞只有D抗原，缺乏C、E、c、e抗原，其红细胞上D抗原位点比一般红细胞多,抗原活性强。
3.Rhnull型红细胞上测不出Rh抗原，也没有LW抗原，但能产生广谱抗Rh抗体，其红细胞血清能与除Rh。u.以外所有红细胞发生反应. (十八)Rh血型分型试验特别注意事项
1。Rh抗血清质量应符合要求，用毕后应立即放置4℃冰箱保存，以免细菌繁殖污染.如出现浑浊或变色则不能使用。 2.试管、滴管必须清洁干燥，防止溶血。 3。严格按照每种试剂的使用说明书进行操作。 (十九）报告时间
Rh血型分型试验，一般于检测当日下午17点前出结果并上传HIS,住院患者的检验报告单由卫生员于次日上午发回申请单所在的临床科室，门诊患者次日于门诊楼一层挂号大厅化验单领取处取检验报告单。 （二十）相关文件
1.抗D、抗C、抗E、抗c、抗e标准血清使用说明书。 2.临床输血技术规范.北京:中华人民共和国卫生部医政司(2000）。
3.中国输血技术操作规程(血站部分）.天津：中华人民共和国卫生部医政司（1997).
六、ABO及Rh血型抗体效价测定试验标准操作规程
(一）检验目的
检测血清中ABO及Rh血型抗体效价，为新生儿溶血病的诊断和预防、骨髓移植和干细胞移植后供者细胞存活状态评价提供依据。 (二)检验原理
· ABO及Rh血型抗体在一定介质条件下与相应红细胞抗原结合后会出现红细胞凝集,不同的凝集强度会间接反应出血型抗体结合抗原的能力（效价）.不同标本在血型抗体反应活性均较高的情况下都会使相应红细胞出现最强凝集（4+），无法真正区分不同标本间血型抗体结合抗原的能力差异.通过将血清(或血浆）连续倍比稀释,观察稀释后血清与相应抗原红细胞凝集反应强度，能够发现不同标本之间血型抗体反应活性的差异或同一受检者不同时期血型抗体反应活性的变
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化情况。在确定统一凝集强度的情况下（最后一个1+),产生凝集的最高稀释度的倒数即为该标本的抗体效价。 （三）适用范围
1。ABO血型抗体效价测定 ①孕妇血型抗体效价检测，用于ABO血型新生儿溶血病风险评估；②骨髓移植、干细胞移植后供者细胞存活状态（嵌合)评价。
2.Rh血型抗体效价测定 用于明确产生Rh血型系统不规则抗体的孕妇，以动态评估发生Rh血型新生儿溶血病的风险，主要测定IgG类Rh抗体。 (四）设备性能参数
参见KA-2200血清学专用离心机、达亚美ID离心机、达亚美ID孵育器、强生OrthoBioVue离心机使用说明书。 （五）器材与试剂
1.器材 血清学专用离心机达亚美ID离心机、达亚美ID孵育器、强生Ortho Biovue离心机、
塑料软试管、塑料硬质试管(75mm ×12mm)、试管架、一次性塑料滴管、移液器、一次性移液枪头、医学专用封口膜、37℃水浴箱等。
2.试剂 DiaMed Coombs卡、Othro BiovueCoombs卡、生理盐水、抗IgG抗体试剂（市售单克隆）、凝聚胺试剂、2-Me、致敏的阳性对照细胞（自制）。 （六）样本要求
EDTA—K2或EDTA-K3抗凝全血≥3ml，经B600-A型离心机1 760g条件下离心5分钟,离心后无溶血及明显乳糜。 （七)校准步骤
严格参照KA—2200血清学专用离心机、达亚美ID离心机、达亚美ID孵育器、强生OrthoBiovue 离心机使用说明书执行。
（八）操作程序
1.ABO血型抗体效价测定 (1)IgM类抗体测定
①血清(或血浆)连续倍比稀释：排列10支试管按顺序编号.每管用加样枪各加生理盐水100µ1，在第1管中加入待检血清100µl,混匀后移出100µ1转至第2
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管，以同样操作稀释至第10管,从第10管吸出100µ1暂时保留在另一试管中,以备必要时做进一步稀释。这样从第1管到第10管的血清稀释度依次是1：2，1：4,……1：1 024，移除第10管稀释后的多余的100µ1血清单独保存备用。 ②加红细胞悬液:在每管稀释后的血清(或血浆)各加3%相应红细胞悬液50µ1，混匀（如待检血清抗体为抗A，则加入A型标准红细胞悬液；如待检血清抗体为抗B，则加入B型标准红细胞悬液；如待检血清中既有抗A又有抗B，则倍比稀释两份血清，一份加入A型标准红细胞悬液，另一份加入B型标准红细胞悬液）。
③离心与结果观察：使用KA—2200台式离心机在1 000g条件下,离心15秒后观察结果.以肉眼观察到最后一个1+的凝集管作为判断的终点,终点血清稀释度的倒数即为其IgM类抗体的效价(Titer),或称滴度。 （2）IgG类抗体效价滴定
①IgM类抗体的破坏：须取适量血清或血浆(0。5或1.0m1）加等体积2—Me溶液(也可选用DDT试剂)混合，封口，置37℃水浴箱孵育30分钟。
②血清(或血浆)连续倍量稀释：操作步骤与IgM类ABO血型抗体倍量稀释方法相同.
③效价滴定操作
经典间接抗人球法：在倍比稀释血清或血浆中加入3%对应的A型(或B型）红细胞悬液50µl，37℃水浴30分钟；生理盐水洗涤3遍，最后1遍在吸水纸上控干,加入抗IgG抗人球蛋白试剂血清1滴，使用血型血清学专用离心机在1 000g条件下，离心15秒后观察并记录结果。
凝聚胺法：在倍比稀释血清或血浆中加入3％对应的A型(或B型）红细胞悬液50µ1混匀；各试管分别加LIM液0.65ml，充分混合均匀后，再各加Polybrene溶液2滴，并混合均匀;使用血型血清学专用离心机Ⅱ档(在1 000g条件下，15秒)离心，把上清液倒掉,不要沥干，让管底残留约0。1ml液体；轻轻摇动试管，目测红细胞有无凝集，如无凝集,则必须重做以上步骤；最后加入Resus—pending液2滴,轻轻转动试管混合并同时观察结果.如果在30秒至1分钟内凝集散开，为阴性；如凝集不散开，则为红细胞抗原抗体结合的特异性反应,需要具体判断凝集强度。
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DiaMed Coombs卡式法：撕掉Coombs卡上的锡箔，在每一个反应孔下做好标记；依次在每孔中加入0。8％的A型(或B型）红细胞悬液50µl和倍比稀释后血清或(血浆)25µ1；37℃孵育15分钟，达亚美专用离心机在1 030g条件下，离心10分钟后判断结果。
AutoVuelnnova Coombs卡式法：撕掉Coombs卡上的锡箔，在每一个反应孔下做好标记；先向每个反应柱内加入50rtl BILSS液,再分别向反应柱内加入10rd 3％A型(或B型）红细胞悬液，最后向反应柱内加入40µl患者血清或血浆；观察柱中的反应物各组分是否混匀，必要时轻弹几下微柱，使反应物充分混匀；37℃孵育10分钟，用BioVue离心机双向离心5分钟，离心必须在加样后30分钟内进行;从微柱正反两面判读并记录结果.
④结果判定:通常每种方法都是以肉眼观察到最后一个+的凝集作为判断的终点，终点血清(或血浆)稀释度的倒数为效价(Tlter)，或称滴度。 2。IgG类Rh血型抗体效价测定
（1)IgM类Rh抗体的破坏:如果血清中同时含有IgM类Rh同型抗体,需要先将IgM类抗体破坏,操作步骤与IgM类ABO抗体的破坏步骤相同。
(2)血清(或血浆）连续倍比稀释：操作步骤与IgM类ABO血型抗体倍比稀释方法相同.
(3）IgG类Rh血型抗体效价滴定操作。
①经典间接抗人球法:在倍比稀释血清或血浆中加入3％对应的O型D阳性（或纯合E、纯合e、纯合C、纯合c）红细胞悬液50µl，37℃水浴30分钟；生理盐水洗涤3遍,最后1遍在吸水纸上控干，加抗IgG抗人球蛋白试剂血清1滴，使用血型血清学专用离心机在1 000g条件下，离心15秒后观察并记录结果。 ②凝聚胺法：在倍比稀释血清或血浆中加入3％对应的O型D阳性(或纯合E、纯合e、纯合C、纯合c)红细胞悬液50µl混匀;各试管分别加LIM液0.65ml,充分混合均匀后，再各加Polybrene溶液2滴，并混合均匀；使用血型血清学专用离心机Ⅱ档（在1000g条件下，离心15秒）离心，把上清液倒掉，不要沥干,让管底残留约0。1ml液体;轻轻摇动试管，目测红细胞有无凝集,如无凝集，则必须重做以上步骤;最后加入Resus-pending液2滴，轻轻转动试管混合并同时 观察结果。如果在30秒至1分钟内凝集散开，为阴性；如凝集不散开,则为红细
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胞抗原抗体结合的特异性反应，需要具体判断凝集强度。
③DiaMed Coombs卡式法：撕掉Coombs卡上的锡箔，在每一个反应孔下做好标记;依次在每孔中加入0。8％的O型D阳性（或纯合E、纯合e、纯合C、纯合c)红细胞悬液50µl和稀释后血清或（血浆）25µl;37℃孵育15分钟，使用达亚美专用离心机在1 030g条件下,离心10分钟后判断结果。
④AutoVue lnnova Coombs卡式法：撕掉Coombs卡上的锡箔,在每一个反应孔下做好标记;先向每个反应柱内加入50µl BILSS液,再分别向反应柱内加入10µl 3%O型D阳性（或纯合E、纯合e、纯合C、纯合c)红细胞悬液，最后向反应柱内加入40µl患者血清或血浆；观察柱中的反应物各组分是否混匀，必要时轻弹几下微柱，使反应物充分混匀；37℃孵育10分钟，用BioVue离心机双向离心5分钟，离心必须在加样后30分钟内进行；从微柱正反两面判读并记录结果。 （4)结果判定：通常每种方法都是以肉眼观察到最后一个1+的凝集作为判断的终点,终点血清（或血浆)稀释度的倒数为效价(Titer),或称滴度。 3。检验结果的输入与确认
(1)启动“检验程序”，输入用户名及口令后，进入检验程序。
（2）单击“检验”菜单,选择“检验结果录入／修改”，通过申请序号进行检验结果的录入及修改。
(3)检验结果的确认：检验结果应由实验室负责人或授权人员进行确认，方法为单击“结果处理\"菜单，选择“报告确认\"进入结果确认，通过选择“工作单元”“报告日期”“单张”或“批量”后,按“提取\"键提取已经传输或录入的检验结果，经两人核对无误后按“确认”键进行确认。 （九)质量控制
1。室内质量控制 凝聚胺法、经典抗人球蛋白法、卡式抗人球蛋白法室内质控均参照《输血相容性检测室内质量控制管理制度》进行.
2.室间质量评价 抗体效价测定目前尚无统一的室间质量评价活动。 （十）干扰因素
IgM类抗体破坏不完全会在一定程度上影响IgG类抗体效价结果的判断。 （十一）结果计算及测量不确定度 不适用。
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(十二）生物参考区间 不适用。
(十三）检验结果可报告区间 不适用
（十四)警告／危急值
1。ABO血型不合时孕妇产前ABO抗体效价一般以64作为临界值，效价≥64认为可能有临床意义，需要进行动态观察抗体效价的变化，如果2次检测效价增加2倍或更多，被认为是发生新生儿溶血病的指征，应该进行更紧密的检测，以便及时采取治疗措施；
2.RhD血型不合时孕妇产前ABO抗体效价一般以16作为临界值，效价≥16认为有临床意义,需要进行动态观察抗体效价的变化。 （十五）实验室解释
孕妇体内血型抗体效价的升高提示发生新生概溶血病的概率增大，需要进行连续动态监测。骨髓移植或干细胞移植患者移植后ABO血型抗体效价的改变可以间接反映供者细胞的存活、增殖情况。 (十六）安全性预警措施
1。实验室及工作人员一般安全防护措施参见《实验室安全与卫生管理制度》. 2.发生血液标本溢出时，应参照《实验室消毒与清洁管理制度》对污染的环境进行消毒处理。
3.操作人员发生职业暴露时，应参照《实验室职业暴露预防与处置管理制度》及时进行相应处理。
4。在仪器运转过程中，勿触及样品针、移动的传输装置等，避免造成人身伤害。禁止触摸仪器密封面板内的电路，防止造成电击损伤。 5.对突发传染性疾病的血液标本应启 动特殊的安全防护程序。 (十七）变异潜在来源 不适用。
（十八)ABO及Rh血型抗体效价测定试验特别注意事项
1.在抗体倍比稀释过程中，不更换枪头，每吸完一次可用纸巾稍稍吸干。这
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与更换枪头的结果将不一样。
2.如果一种血清要分别和几种红细胞作用，要将血清做总稀释，然后分别转移同样的试验容量到所需的试管中，这样会缩小误差。
3。看结果时可能出现低稀释度的凝集强度比高稀释度的要弱,这是前带现象。
4.对1份血清如果重复滴定，结果可能不一样,如果只有一个稀释度的差别,即前后1管之差，属正常误差范围。
5。测定IgG类抗体效价时，用等量巯基试剂破坏IgM类抗体时，血清已被稀释，计算效价时要加一个稀释度。
6。破坏后的血清倍比稀释加入相应的细胞后,立即离心、肉眼观察、记录结果，然后再继续IgG抗体检测的操作，同样记录结果。
7.为避免不同人操作造成的一些误差，保证结果的连续性，效价测定一概用加样枪加样.
8.为了解抗体的效价变化而连续取样检查,最好将标本冰冻保存，以便与以后的标本进行比较对照。 (十九)报告时间
ABO及Rh血型抗体效价测定试验，一般于检测当日下午17时前出结果并上传HIS，住院患者的检验报告单由卫生员于次日上午发回申请单所在的临床科室，门诊患者次日于门诊楼一层挂号大厅化验单领取处取检验报告单。 (二十)相关文件
1。DiaMed Coombs卡、Othro BioVue Coombs卡、生理盐水、抗IgG抗体试剂（市售单克隆)、凝聚胺试剂、2—Me试剂使用说明书。 2.临床输血技术规范。北京：中华人民共和国卫生部医政司(2000). 3.中国输血技术操作规程(血站部分）.天津:中华人民共和国卫生部医政司(1997).
七、新生儿溶血病血清学检查标准操作规程
（一）检验目的
检测孕妇产前与其丈夫ABO及Rh血型相容性、孕妇IgG抗体效价、产后新生儿体内不相容抗体存在情况、新生儿与产妇之间血型相容性,为新生儿溶血
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病的预防、诊断及治疗提供可靠的实验室依据。 （二)检验原理
新生儿溶血病是由母婴血型不合，母亲体内与新生儿红细胞抗原不配合的IgG性质的血型抗体进入新生儿体内，破坏新生儿或胎儿红细胞而引起，可发生在胎儿期和新生儿早期，溶血严重者可出现死胎而流产，存活者则有不同程度的新生儿黄疸。新生儿溶血病产前诊断方法主要包括检测胎儿父母的ABO及Rh血型、孕妇不规则抗体筛查、外周血抗A／抗B或Rh抗体效价来判断新生儿溶血病发生的可能性及严重程度；新生儿溶血病产后诊断主要包括母子ABO及RhD血型鉴定试验、新生儿标本三项试验,为临床诊断及进一步采取治疗手段提供可靠的依据。 (三)适用范围
适用于新生儿溶血病产前、产后血型血清学试验. （四）设备性能参数
参见血清学专用离心机、达亚美ID离心机、达亚美ID孵育器、强生Ortho BioVue离心机及各全自动血型／配血系统使用说明书。 （五)器材与试剂
1.器材血清学专用离心机、达亚美ID离心机、达亚美ID孵育器、强生Or—tho BioVue离心机、塑料软试管、塑料硬质试管（75mmXl2mm）、试管架、一次性塑料滴管、记号笔、移液枪、一次性移液枪头.
2.试剂 DiaMed ABO／RhD血型卡、OrthoBioVueABO／RhD血型卡、抗A、抗B血清、Rh分，型血清、生理盐水、抗球蛋白试剂（市售单克隆)、抗体筛查试剂红细胞、抗体鉴定试剂红细胞、致敏的阳性对照细胞(自制）. （六)标本要求
1.夫妇标本 EDTA-K2或EDTA-K3抗凝全血≥3ml（手工操作时也可以使用不抗凝标本）,经B600—A型离心机在1 760g条件下,离心5分钟,离心后无溶血及明显乳糜。
2。患儿标本 EDTA—K2或EDTA-K3抗凝全血≥3ml(手工操作时也可以使用不抗凝标本），经B600—A型离心机在1 760g条件下,离心5分钟,离心后无明显乳糜。
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（七）校准步骤
参照血清学专用离心机、达亚美ID离心机、达亚美ID孵育器、OrthoBioVue离心机及各全自动血型／配血系统使用说明书中的校准要求执行。 ’ （八）操作程序 1.产前血清学检查
(1）取夫妇全血标本分别测定ABO血型及RhD血型,具体操作参照《ABO及RhD血型鉴定试验标准操作规程》。
(2）夫妇ABO血型不配合时,做孕妇血清抗体检查.
①IgG抗A（B）或Rh血型抗体效价测定:参照《ABO及Rh血型抗体效价测定试验标准操作规程》.
②中和孕妇血清做交叉试验：用DTT或2-Me破坏母血清中IgM抗体，以此处理后血清与其丈夫细胞做凝聚胺法或IAT的交叉配血试验,如果出现阳性则可能引起HDN。 2。产后血清学检查
（1）ABO新生儿溶血病血型血清学检查。
①母子标本的ABO血型鉴定：分别取产妇、新生儿的洗涤红细胞鉴定ABO血型，具体操作参照《ABO及RhD血型鉴定试验标准操作规程》。
②新生儿标本的三项试验。a.直接抗人球蛋白试验：将新生儿红细胞用生理盐水充分洗涤3遍，最后1遍将上清控干，然后加1滴抗人球蛋白试剂，经血清学专用离心机在1 000g条件下,离心15秒，在显微镜下观察结果，有凝集为阳性，无凝集为阴性。也可以采用卡式抗人球法检测。参见《手工抗人球蛋白试验标准操作规程》。b.游离IgG抗体测定：取试管3支,分别标记Ac、Bc、Oc，每管中各加2滴新生儿血清及相应A、B、O型试剂红细胞各1滴，置37℃水浴30分钟取出，用生理盐水洗涤3次,最后1次控干上清液，然后在各管中加1滴抗人球蛋白试剂，使用血清学专用离心机在1 000g条件下，离心15秒,判读结果(表14-2)。
也可采用凝聚胺法或卡式抗人球法检测.再取3系抗体筛查细胞检测新生儿血清中是否存在ABO系统以外的不规则抗体,可以使用卡式抗人球法检测。c。放散试验:用生理盐水将新生儿红细胞充分洗涤4—6次，取1体积洗涤后压积红细胞
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加等体积的生理盐水,置56℃水浴10分钟,其间不断振摇，然后在预温的离心管中在1 760g条件下，离心1分钟,立即将上层红色放散液转移到另一试管中.取上清放散液分成3份，于标有A、B、O的试管中，分别加入相应的A、B、O试剂红细胞各1滴,置37‘C水浴30分钟,用生理盐水洗涤3次，最后1次控干上清，然后在各管中加1滴抗人球蛋白试剂，使用血清学专用离心机在1 000g条件下，离心15秒，判读结果(表14—3)。也可采用凝聚胺法或卡式抗人球法检测. ③产妇标本的检查：破坏产妇血清（或血浆）做交叉试验:用DTT或2-Me破坏产妇血清（或血浆）中IgM抗体，以此处理后血清分别与新生儿红细胞及与新生儿ABO同型的标准试剂红细胞做凝聚胺法或IAT的交叉试验；产妇血清中ABO系统以外的抗体筛选：用处理后产妇血清做不规则抗体筛查，可采用凝聚胺法或卡式抗人球法检测；测定产妇血清中IgG抗A(B）效价：母亲是O型,新生儿是A型时，测IgG抗A的效价，新生儿是B型时，测IgG抗B的效价.方法参照《ABO及Rh血型抗体效价测定试验标准操作规程》。 (2）Rh新生儿溶血病血清学检查
①母子标本的血型鉴定：分别取产妇、新生儿的洗涤红细胞鉴定Rh血型，具体操作参照《RL血型分型试验（试管法）标准操作规程》。
②新生儿标本的三项试验.a.直接抗球蛋白试验：将子细胞用生理盐水充分洗涤3遍,最后1遍将上清液控干，然后加1滴抗人球蛋白试剂，使用血清学专用离心机在1 000g条件下,离心15秒，判读结果，有凝集为阳性，无凝集为阴性.参见《手工抗人球蛋白试验标准操作规程》.b·游离IgG抗体测定：取试管3只，标记1、2、3号，每管中各加2滴子血清,并分别加入1滴抗筛试剂红细胞悬液，离心看结果,看好结果后，置37℃水浴30分钟取出,用生理盐水洗涤3次，最后1次控干上清液，然后在各管中加1滴抗人球蛋白试剂，使用血清学专用离心机在1000g条件下，离心15秒，判读结果.也可采用凝聚胺法或卡式抗人球法检测。如果结果为阳性，应鉴定其抗体特异性，用10系细胞或10系细胞以上谱细胞做IAT法或凝聚胺法检测，结合谱细胞反应格局，确定抗体特异性。c.放散试验(乙醚或氯仿放散法)：参照《吸收—放散试验标准操作规程》。
③产妇标本的检查.测定产妇血清与新生儿细胞的交叉反应：用新生儿红细胞与2—Me处理后产妇血清（或血浆)做凝聚胺法或IAT交叉配血试验，以确定
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母血清中是否存在针对子细胞抗原的IgG抗体.产妇血清中ABO系统以外抗体的检测：用产妇血清(或血浆)做不规则抗体筛查，可采用凝聚胺法或卡式抗人球法检测。如果存在ABO系统以外的同种抗体,则测定此抗体的特异性及效价，具体操作参照《不规则抗体筛查试验标准操作规程》和《ABO及Rh血型抗体效价测定试验标准操作规程》。 3。检验结果的输入与确认
(1)启动“检验程序”，输入用户名及口令后，进入检验程序.
(2)单击“检验\"菜单,选择“检验结果录入＼修改\"，通过申请序号进行检验结果的录入及修改。
(3)检验结果的确认:检验结果应由实验室负责人或授权人员进行确认,方法为单击“结果处理”菜单，选择“报告确认\"进入结果确认,通过选择“工作单元\"“报告日期”“单张”或“批量”后,按“提取”键提取已经传输或录入的检验结果，经两人核对无误后按“确认”键进行确认。 (九)质量控制 1.室内质量控制
（1）ABO血型、Rh血型鉴定：参照《ABO及RhD血型鉴定试验标准操作规程》。
（2)抗体效价测定：参照《ABO及Rh血型抗体效价测定试验标准操作规程》。 (3）不规则抗体筛查及鉴定：参照《不规则抗体筛查试验标准操作规程》。 (4）产妇与新生儿之间交叉配合试验：参照《交叉配血标准操作规程》。 2.室间质量评价 新生儿溶血病血型血清学检查目前尚无统一的室间质量评价活动. （十)干扰因素
已经发生新生儿溶血病的患儿血清一般呈红色可能会干扰对结果的判断。 （十一)结果计算及测量不确定度 不适用。
(十二)生物参考区间 不适用。
（十三)检验结果可报告区间
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不适用。
(十四)警告／危急值
1.ABO血型不合时孕妇产前ABO抗体效价一般以64作为临界值,效价≥64认为可能有临床意义，需要进行动态观察抗体效价的变化，如果两次检测效价增加2倍或更多,被认为是发生新生儿溶血病的指征，应该进行更紧密的监测，以便及时采取治疗措施。
2。RhD血型不合时孕妇产前Rh抗体效价一般以16作为临界值，效价≥16认为有临床意义，需要进行动态观察抗体效价的变化。
3.新生儿标本的三项试验出现阳性结果时，提示新生儿溶血的存在。 (十五）实验室解释
孕妇体内血型抗体效价的升高提示发生新生儿溶血病的概率增大,需要进行连续动态监测。新生儿标本的三项试验出现阳性结果，提示新生儿溶血的存在，应根据严重程度进行相应的处理。 （十六）安全性预警措施
1.实验室及工作人员一般安全防护措施参见《实验室安全与卫生管理制度》. 2.发生血液标本溢出时，应参照《实验室消毒与清洁管理制度》对污染的环境进行消毒处理.
3。操作人员发生职业暴露时，应参照《实验室职业暴露预防与处置管理制度》及时进行相应处理。
4。在仪器运转过程中，勿触及样品针、移动的传输装置等，避免造成人身伤害。禁止触摸仪器密封面板内的电路，防止造成电击损伤。 5。对突发传染性疾病的血液标本应启动特殊的安全防护程序。 (十七）变异潜在来源 不适用。
(十八)新生儿溶血病血型血清学检查特别注意事项
1。ABO血型不合的新生儿溶血病一般用热放散法,Rh系统及其他系统的用乙醚放散法,放散液用抗人球蛋白法或其他检测IgG抗体的方法检测。
2。新生儿三项试验的结果之间有一定关联，有游离抗体的，直抗应该阳性,放散试验也应该阳性；直抗阳性的，放散试验也应该是阳性，但不一定有游离抗
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体。直抗阴性的其他两项试验应该是阴性，但ABO系统除外。一般认为任何一项出现阳性都可以支持新生儿溶血病的诊断。也有实验结果与临床症状不完全符合的情况.
3.有研究报告提出有的母亲在胎儿娩出24小时以后,IgG抗A或抗B的效价可有明显的下降。 (十九）报告时间
新生儿溶血病血型血清学检查相对复杂，需要多重试验组合来得出最后结论，检测相对耗时，一般检测结果出来后立即上传HIS系统，住院患者的检验报告单由卫生员于次日上午发回申请单所在的临床科室，门诊患者次日于门诊楼一层挂号大厅化验单领取处取检验报告单. (二十）相关文件
1。相应试剂使用说明书。
2.临床输血技术规范.北京中华人民共和国卫生部医政司（2000).
3。中国输血技术操作规程（血站部分).天津：中华人民共和国卫生部医政司(1997）。
八、吸收-放散试验标准操作规程
（一)检验目的
检测红细胞表面可能存在的弱血型抗原、鉴定、分离血清中可能存在的混合抗体,辅助红细胞血型及混合抗体特异性的鉴定。 (二）检验原理
抗体与相应抗原在适合条件下可以发生凝集或致敏，但这种结合是可逆的，如果改变某些物理条件时，抗体可以从结合的红细胞上解脱下来.表达弱血型抗原（A或B等）的红细胞与相应抗体反应不出现凝集现象,但可以吸收相应的抗体，被吸收的抗体在适当条件下可以放散出来,与具有对应正常抗原的红细胞发生反应，检测和鉴定该放散出来的抗体,可以证明相应抗原的存在，也可以将混合抗体得到分离。 （三）适用范围
1。弱血型抗原的鉴定（本操作规程主要选取弱A／B抗原鉴定制定相应试验流程）.
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2.混合血型抗体的分离与鉴定. 3.新生儿溶血病的诊断。 （四）设备性能参数
参见KA—2200血清学专用离心机、B600—A型离心机、电热恒温水浴箱使用说明书。
（五）器材与试剂
1。器材 B600-A型离心机、KA—2200台式离心机、电热恒温水浴箱、塑料软试管、塑料硬质试管（75mm×l2mm）、试管架、一次性塑料滴管、记号笔。 2.试剂 生理盐水、抗A和抗B标准血清（经过筛选后）、抗人球蛋白试剂(市售单克隆或多克隆)、3％反定试剂红细胞. (六）标本要求
抗凝全血经B600-A型离心机在1 760g条件下,离心5分钟后压积红细胞应≥2ml。
（七)校准步骤
参见KA—2200血清学专用离心机、B600-A型离心机、电热恒温水浴箱使用说明书中校准要求执行. (八)操作程序 1.吸收试验
(1)生理盐水洗涤lml压积红细胞至少3遍，最后1次洗涤后,尽量弃去试管中红细胞沉淀上的所有上清盐水.
(2)如怀疑是弱A(或弱B）抗原红细胞,在洗涤后的红细胞中加入lml抗A(或抗B)血清。
(3)将红细胞与抗体试剂充分混匀，在4℃条件下孵育2小时，期间不时轻摇试管，混合红细胞与抗体血清。
(4)使用B600—A型离心机在1 760g条件下，离心5分钟，将所有上清（抗A或抗B试剂）转移到另一支试管中。
(5）将红细胞转移到另一支洁净试管中，用较大体积4℃生理盐水洗涤红细胞至少8遍。保存最后一遍洗涤离心后的上清液，使用3％反定细胞检测其中是否残留游离抗体，如果有应继续洗涤,直至没有游离抗体存在。
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（6）将与红细胞反应后的上清液与其对应的血清原液同步进行倍比稀释，测定其抗体效价的’变化，具体操作参照《ABO及Rh血型抗体效价测定试验标准操作规程》。 2。热放散试验
(1）取吸收后并经洗涤的1体积压积红细胞(对于只做放散试验用来证实红细胞表面是否结合抗体的情况，用生理盐水将其红细胞充分洗涤4～6次制备成洗涤后压积红细胞)加等体积的生理盐水，置56℃水浴10分钟,其间不断振摇，然后在预温的离心管中以2 000g，离心1分钟，立即将上层红色放散液转移到另一试管中。
(2)取上清放散液分成3份,于标有A、B、O的试管中,分别加入相应的A、B、O试剂红细胞各1滴，直接离心观察结果。对于阴性结果，需将试管置37℃水浴30分钟,用生理盐水洗涤3次，最后一次控干上清液,然后在各管中加1滴抗人球蛋白试剂，使用血清学专用离心机在1 000g条件下，离心15秒，判读结果。也可采用凝聚胺法或卡式抗人球法检测。 3。乙醚放散试验
（1）取经洗涤4～6次的受检者压积红细胞1体积，另取1体积生理盐水和2体积乙醚，加入到带塞的玻璃大试管内，剧烈振荡1~2分钟，然后以B600—A白洋离心机在1 760g条件下,离心1分钟。
(2)离心后分成3层，上层是乙醚，中间是红细胞基质，下层是具有抗体的放散液，呈深红色.
（3）用吸管吸出下层放散液，置37℃水浴10分钟，除尽乙醚。 （4）再次离心，取上清液即为放散液。
(5)用经典抗人球法或卡式抗人球法检测乙醚放散液. 4。检验结果的输入与确认
（1）启动“检验程序\"，输入用户名及口令后，进入检验程序。
(2）单击“检验\"菜单，选择“检验结果录入＼修改”，通过申请序号进行检验结果的录入及修改。
(3）检验结果的确认：检验结果应由实验室负责人或授权人员进行确认，方法为单击“结果处理”菜单，选择“报告确认”进入结果确认，通过选择“工作单
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元”“报告日期”“单张”或“批量”后，按“提取\"键提取已经传输或录入的检验结果，经两人核对无误后按“确认”键进行确认。 （九)质量控制
1.室内质量控制 参照《手工抗人球蛋白试验标准操作规程》进行. 2.室间质量评价 吸收放散试验目前尚无统一的室间质量评价活动. (十)干扰因素
1.红细胞吸收相应抗体以后，在放散之前必须经过充分洗涤并经试验证实已无游离抗体存在方可进行放散试验.
2。热放散以后要注意试管保温并以最快速度将放散液分离,防止放散出的抗体再次与细胞结合，造成假阴性。 (十一）结果计算及测量不确定度 不适用。
(十二)生物参考区间 不适用.
（十三）检验结果可报告区间 阴性或阳性。 (十四）警告／危急值
1.怀疑新生儿溶血病、溶血性输血反应的患者，如果放散试验阳性,提示存在溶血，需要及时通知临床医生.
2。弱血型抗原检测时，放散结果阳性时，提示亚型的存在。 (十五）实验室解释
1。新生儿标本放散试验出现阳性结果,提示新生儿溶血的存在，应根据严重程度进行相应的处理。
2。受检者血型结果为亚型时应遵守相应的输血原则。 （十六）安全性预警措施
1.实验室及工作人员一般安全防护措施参见《实验室安全与卫生管理制度》. 2。发生血液标本溢出时，应参照《实验室消毒与清洁管理制度》对污染的环境进行消毒处理。
3.操作人员发生职业暴露时,应参照《实验室职业暴露预防与处置管理制度》
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及时进行相应处理。
4.在仪器运转过程中，勿触及样品针、移动的传输装置等，避免造成人身伤害.禁止触摸仪器密封面板内的电路，防止造成电击损伤.
5.对突发传染性疾病的血液标本应启动特殊的安全防护程序。 (十七)变异潜在来源 不适用。
(十八）吸收-放散试验特别注意事项
1。ABO血型弱抗原鉴定一般采用热放散，Rh血型系统抗体分离、鉴定一般采用乙醚放散。
2。使用乙醚放散时要注意实验室通风,确保操作人员安全。
3.如果需要检测热放散后的红细胞血型，则应该用45℃代替56℃，以减少红细胞溶血，放散时间可以延长到15分钟. （十九）报告时间
吸收放散试验一般于检测完成后立即将结果上传HIS，对于用于溶血诊断试验中的阳性结果应同时电话通知患者经治医师。住院患者的检验报告单由卫生员于次日上午发回申请单所在的临床科室，门诊患者次日于门诊楼一层挂号大厅化验单领取处取检验报告单。 （二十)相关文件 1。相应试剂使用说明书.
2。临床输血技术规范.北京中华人民共和国卫生部医政司（2000)。 3。中国输血技术操作规程（血站部分）。天津:中华人民共和国卫生部医政司（1997).
九、RhD血型确证试验(卡式抗人球法）标准操作规程
(一）检验目的
确证初筛RhD血型为阴性的献血者RhD抗原表达情况，防止正常D、变异D（弱D、不完全D、不完全弱D、放散D)被误定型为RhD阴性。 (二)检验原理
通常情况下只有初筛为RhD阴性的献血者需要做确证试验,以确保将真正RhD阴性的血液输给需要RhD阴性血液的患者，而临床初筛为RhD阴性输血患
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者一般不做确证试验，而是直接输注RhD阴性血液成分。献血者RhD初筛一般使用单克隆IgM抗体或IgM+IgG抗体(纸板法或玻片法）进行检测（盐水法)，可能出现弱D、不完全D、不完全弱D的漏检。RhD血型确证试验采用3个厂家、3个批号,至少两种试剂中含有IgG类抗D抗体，通过卡式抗人球蛋白法进行D抗原检测,可以最大限度减少D抗原的漏检，确定受检者RhD血型. (三）适用范围
适用于献血者RhD血型确证试验。 (四)设备性能参数
参见DiaMed ID离心机、DiaMed ID孵育器、B600—A型低速离心机使用说明书.
（五)器材与试剂
1.器材 DiaMed ID离心机、DiaMedID孵育器、B600—A型低速离心机、塑料软试管、塑料硬质试管(75mmXl2mm）、试管架、记号笔。
2.试剂 DiaMed微柱凝胶Coombs卡，2号稀释液，生理盐水，3个厂家不同来源的抗D标准血清(至少两种试剂是IgG类或含有IgG类抗体），3系、10系或16系谱细胞（用于阴阳性对照). （六)样本要求
供者标本:枸橼酸盐抗凝，全血量≥3ml，经B600—A型离心机在1 760g条件下，离心5分钟,离心后无溶血、无凝块及明显乳糜。 (七）校准步骤
参照DiaMed ID离心机、DiaMed ID孵育器、B600-A型低速离心机使用说明书中的校准要求执行。 (八）操作程序
1.取受检者（常规纸板法鉴定为RhD阴性)的红细胞，经生理盐水洗涤3次，取压积红细胞10µl加入2号系统稀释液1。0ml配成1％的红细胞悬液。 2。取3个厂家不同来源的抗D标准血清，一般组合形式为单独IgM抗体、IgM+IgG抗体、单独IgG抗体。
3.在微柱凝胶卡上依次标记IgM抗体检测孔、IgM+IgG抗体检测孔、IgG抗体检测孔、自身对照孔，阴性对照孔和阳性对照孔。
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4.在IgM抗体检测孔、IgM+IgG抗体检测孔、IgG抗体检测孔和自身对照孔中分别加入已配制好的受检者1％的红细胞悬液50µl,再分别在对应的孔中加入25µl相对应的标准血清抗体，在自身对照孔中加人受检者血清25µ1.分别在阴性对照孔和阳性对照孔中加入1％阳性对照细胞和阴性对照细胞各50µl，再分别加入IgG抗D抗体25µl.
5.使用DiaMedID专用孵育器37℃孵育15分钟。用DiaMed ID专用离心机在1 030g条件下,离心10分钟。
6。结果判读:自身对照、阴性对照结果为阴性，阳性对照结果为阳性说明试剂和反应体系有效，检测孔出现红细胞凝集在上层或中间层的为阳性，全部沉积在底层的为阴性。自身对照、阴性对照结果为阳性和（或)阳性对照结果为阴性时说明试剂和(或）反应体系失效，需要更换试剂和（或)反应体系后重复试验. 7。三批试验结果中有一批或多批为阳性的，结果即报告应为：D变异型。相应血液应作为RhD阳性血液输给RhD阳性患者，而献血者自身在将来输血时应作为RhD阴性患者对待。
8。检验结果的确认.确证试验结果应由实验室负责人或授权人员进行确认签字,出现阳性结果应将被检血液视为RhD阳性血液使用，阴性结果将被检血液视为RhD阴性血液使用。 (九)质量控制
1。室内质量控制 通过每批次的阴阳性对照和自身对照试验实现。 2.室间质量评价 目前尚无统一的室间质量评价活动。 (十）干扰因素
1。离心条件影响试验结果，最好使用血清学专用离心机，以防假阳性或假阴性结果出现。
2。当用未经洗涤的细胞做试验时，样本中的自身凝集和异常蛋白质可能引起假阳性结果。
(十一）结果计算及测量不确定度 不适用。
(十二）生物参考区间 不适用。
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(十三）检验结果可报告区间 阴性、阳性。 (十四）警告／危急值
D变异型相应血液应作为RhD阳性输给RhD阳性患者，而献血者自身在将来输血时应作为RhD阴性患者对待。 （十五)实验室解释
D变异型相应血液应作为RhD阳性输给RhD阳性患者,而献血者自身在将来输血时应作为RhD阴性患者对待。实验室应该向献血者说明D变异型作为供、受者时的区别和注意事项。 （十六)安全性预警措施
1。实验室及工作人员一般安全防护措施参见《实验室安全与卫生管理制度》. 2.发生血液标本溢出时,应参照《实验室消毒与清洁管理制度。》对污染的环境进行消毒处理。
3.操作人员发生职业暴露时，应参照《实验室职业暴露预防与处置管理制度》及时进行相应处理。
4。在仪器运转过程中，勿触及样品针、移动的传输装置等，避免造成人身伤害。禁止触摸仪器密封面板内的电路,防止造成电击损伤。 5.对突发传染性疾病的血液标本应启动特殊的安全防护程序。 (十七）变异潜在来源
D变异型，包括弱D、部分D、放散型D等均可出现RhD初筛试验结果阴性、确认试验结果阳性.
(十八）Rh血型确证试验特别注意事项
1。RhD抗血清质量应符合要求，用毕后应放置冰箱保存，以免细菌污染。室温放置时间过长或反复冻融会导致抗体效价降低，如出现浑浊或变色则不能使用。
2。加样时应先加红细胞悬液,后加血清抗体. （十九)报告时间
血液采集当天完成试验并修改对应血液信息。 （二十)相关文件
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1。抗D标准血清、DiaMed微柱凝胶Coombs卡使用说明书. 2.临床输血技术规范.北京:中华人民共和国卫生部医政司（2000)。 3.中国输血技术操作规程（血站部分）.天津：中华人民共和国卫生部医政司(1997).
十、ABH唾液型物质凝集抑制试验标准
操作规程 （一）检验目的
通过检验分泌型个体唾液中是否存在3H抗原来间接证明受检者红细胞表面是否存在相应ABH抗原,进而辅助证实红细胞表面ABH弱抗原的存在. (二）检验原理
人类红细胞ABH抗原除在红细胞表面表达以外,约有80％的分泌型个体可以产生水溶性的ABH抗原，这些水溶性抗原可以进入除脑脊液以外的其他体液之中。常规实验室条件下直接检测可溶性抗体存在技术困难，但通过检测可溶性抗原对相应稀释修正过的抗体的抑制作用，间接证实可溶性抗原的存在，从而为证实红细胞表面ABH血型弱抗原的存在提供支持证据。 (三）适用范围
适用于疑似ABO亚型分泌型受检者唾液中A、B、H抗原的检测。 (四）设备性能参数
参见KA-2200血清学专用离心机、B600-A型低速离心机使用说明书。 (五）器材与试剂
1。器材 KA—2200血清学专用离心机、B600-A型低速离心机、酒精灯、广口小烧杯、玻璃大试管、水浴锅、阅片灯箱、硬质塑料试管（75mm×l2mm）、试管架、一次性塑料滴管、100µl移液器、记号笔.
2.试剂 经实验室验证具有抑制活性的单克隆抗A和抗B血清、抗H凝集素或单克隆抗H试剂、单克隆抗Lea和Leb抗体、ABO反定型试剂红细胞、生理盐水、3系或10系或16系谱细胞(用于Lewis血清抗体的阴阳性对照)、已知分泌型或非分泌型的唾液样本（用于抑制试验中的阳性和阴性对照)。 （六）样本要求
1。EDTA-K3或EDTA—K：抗凝静脉血≥3ml经B600—A型离心机在1 760g
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条件下，离心5分钟，离心后无溶血及明显乳糜. 2。受检者新鲜唾液5-10ml。 （七)校准步骤
参照KA—2200血清学专用离心机、B600—A型低速离心机使用说明书中的校准要求执行。 (八)操作程序
1。常规ABO血型鉴定：参考《ABO及RhD血型鉴定试验标准操作规程》进行。
2.对于常规ABO血型鉴定结果不确定,疑似ABO亚型弱抗原存在时，方考虑进行唾液型物质检测：
（1)在进行唾液型物质检测前应先确定受检者是否为分泌型：先对受检者外周静脉血标本进行Lewis抗原测定,具体操作步骤请参照对应试剂使用说明书进行.
（2）受检者分泌型的确定原则:ABH分泌型个体通常为Le（a-b+），非分泌型个体为Le（a+b-）。
3。分泌型个体唾液ABH物质检测
(1)唾液标本的制备：①取一个洁净广口小烧杯收集受检者唾液5~10ml.大多数人可以在几分钟内收集到足够数量的唾液标本.收集唾液时受检者可以咀嚼洁净石蜡或橡皮带等以促进唾液分泌,但不能咀嚼口香糖或其他任何含有糖分或蛋白质成分的物质，防止污染唾液标本.②将收集的唾液转移到洁净的玻璃大试管中,在1 000g条件下，离心10分钟。③将离心后的上清液转移到另外一个玻璃大试管中，放人沸水浴中10分钟，使唾液淀粉酶完全失活.④将沸水煮过的唾液标本再次在1 000g条件下,离心10分钟，留取上清液到另一洁净试管中待用。⑤如果后续试验在几个小时内完成，制备后的唾液标本可以放4℃冷藏；如果试验不在制备当天进行，则应将标本置于-20℃条件下冷冻保存，其标本活力至少可以保持1年以上.
(2）抗A、抗B、抗H血清试剂反应活性的修正：①抗A、抗B、抗H血清连续倍比稀释:分别排列10支试管按顺序编号.每管用移液枪各加生理盐水100µl,在第1管中加入待检抗A（或抗B或抗H)血清100µl，混匀后移出100µl转至第
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2管，以同样操作稀释至第10管，从第10管吸出100µl暂时保留在另一试管中，以备必要时做进一步稀释。这样从第1管到第10管的血清稀释度依次是1:2，1：4，……1:1 024，移除第10管稀释后的多余的100µl血清单独保存备用。②加红细胞悬液：在每管稀释后的血清中各加3%相应红细胞悬液50µ1，混匀(如待检血清抗体为抗A，则加入A型标准红细胞悬液；如待检血清抗体为抗B,则加入B型标准红细胞悬液;如待检血清为抗H，则加入O型标准红细胞悬液)。③离心与结果观察：使用
KA-2200台式离心机在1 000g条件下,离心15秒后观察结果,记录出现最后一个2+的凝集管的稀释倍数.④制备稀释修正血清：根据上步得到的稀释倍数，使用生理盐水将适量抗A、抗B、抗H标准血清分别稀释到相应倍数后待用。 (3）凝集抑制试验：①取4支洁净硬质塑料试管，分别标注“受检者\"“分泌型”“非分泌型”及“生理盐水”，前3管分别滴加50µl（1滴）对应的处理后唾液样本,第4管滴加生理盐水。②在4支试管中分别滴加50µl（1滴)经稀释的修正血清。③室温孵育10分钟。④每个试管中滴加50µl (1滴)对应的洗涤后3％～5％ABO标准红细胞悬液，混匀后室温孵育30分钟.⑤离心与结果观察：使用KA-2200台式离心机在1 000g条件下，离心15秒后肉眼观察反应结果。 (4)结果分析：①若生理盐水对照管的抗体未与对应指示红细胞发生凝集反应，则本次凝集抑制试验失败。可能是由于抗体稀释环节出现偏差，应重新确定抗体稀释倍数，重新配置修正血清后重复上述试验步骤。②“分泌型\"试管结果为阴性、“分泌型”试管结果为阳性，说明质控结果在控，试验数据可以采信，否则为失控，需查找原因后重复试验.③在“生理盐水”试管、“分泌型”试管、“非分泌型’'试管结果均符合要求的前提下,“受检者”试管中指示红细胞与对应抗体发生凝集反应说明唾液中不含有相应抗原;指示红细胞与对应抗体不发生凝集反应说明唾液中含有相应抗原。
（5)检验结果的确认：本试验为输血相容性检测实验室非常规辅助检测项目，通常不需要单独出具检验报告单，检验结果可以记录在ABO血型鉴定报告单上或专用的特殊检查登记表单上，并由实验室负责人或授权人员进行确认签字.
（九）质量控制
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1。室内质量控制
（1)ABO血型鉴定：参照《ABO及RhD血型鉴定试验标准操作规程》中的相关质控要求进行。
(2）Lewis抗原鉴定：通过在每批次试验中加入阴、阳性对照和自身对照实现。阴阳性对照样本可以从3系或10系或16系谱细胞中选取。
(3）凝集抑制试验：通过使用已知的“分泌型\"，“非分泌型”及“生理盐水”样本作为对照，实现对整个试验体系的质量控制。
2.室间质量评价 目前尚无统一的室间质量评价活动。 （十）干扰因素
1.离心条件影响实验结果，最好使用血清学专用离心机，以防假阳性或假阴性结果出现。
2.当用未经洗涤的标准红细胞做抑制试验时，样本中存在的可溶性抗原可能会中和对应稀释抗体而引起假阴性结果。 （十一)结果计算及测量不确定度 不适用。
(十二）生物参考区间 不适用.
（十三）检验结果可报告区间 不适用.
（十四）警告／危急值
通过本试验可以进一步确认受检者红细胞血型抗原亚型,防止ABO血型定型错误的发生。实验室应及时通知临床或受检者，并提供输血时应遵循的基本指导原则,确保临床输血安全。 （十五)实验室解释
本试验作为ABO血型亚型鉴定的辅助试验之一,一般不单独用于证明红细胞表面ABO弱抗原的存在,多与其他试验联合进行;本试验可以用于受检者分泌型或非分泌型的鉴别。 (十六）安全性预警措施
1。实验室及工作人员一般安全防护措施参见《实验室安全与卫生管理制度》。
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2。发生血液标本溢出时，应参照《实验室消毒与清洁管理制度》对污染的环境进行消毒处理。
3.操作人员发生职业暴露时,应参照《实验室职业暴露预防与处置管理制度》及时进行相应处理。
4.在仪器运转过程中，勿触及样品针、移动的传输装置等，避免造成人身伤害。禁止触摸仪器密封面板内的电路,防止造成电击损伤。 5.对突发传染性疾病的血液标本应启动特殊的安全防护程序。 (十七）变异潜在来源
部分Le(a-b-）、Le(a+b+）个体具有较弱的分泌基因，其唾液中可以有少量ABH血型物质，但一般方法不易检出。 （十八)特别注意事项
1.只有确定为分泌型个体进行唾液型物质检测才有实际意义。
2。本试验由多个试验组合而成，且多为手工操作，要求操作者具有丰富的实践经验，操作规范、准确，每个分步试验都要通过设置阴阳性对照的方式进行严格的室内质控，只有质控结果正常时，整个试验结果的可靠性才有保证。 (十九)报告时间
血液、及唾液标本采集当天完成试验，一般不单独形成报告。 (二十)相关文件
1。单克隆抗A、抗B、抗H标准血清，单克隆抗Lea和抗Leb抗体,ABO反定型试剂红细胞试剂使用说明书。
2。临床输血技术规范.中华人民共和国卫生部医政司（2000)。
3.中国输血技术操作规程（血站部分).中华人民共和国卫生部医政司(1997)。 4.李勇，杨贵贞.人类红细胞血型学实用理论与实验技术.北京:中国科学技术出版社，1999。
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第五章 全自动血型配血系统作业指导书
ORTHO Auto Vue Innova全自动血型配血系统标准操作规程
（一)检验项目
1.ABO及RhD血型鉴定试验。 2.不规则抗体筛查试验。 3。交叉配血试验. （二)主要试剂
1.ORTHOBioVue ABO／RhD血型卡、ORTHO BioVue Coombs卡、3系3%抗体筛查细胞，3％反定细胞、蒸馏水(或去离子水)、生理盐水、BLISS液。 2。BLISS液细胞类试剂2~8℃保存,血型卡、Coombs卡、生理盐水室温保存。 3.所有应放室温保存的试剂,注意防尘、防紫外线、防潮。 4。变质、超过效期的试剂不能使用。 （三）标本处理
原始样品采集、制备、处理、检验和存放参见《输血相容性检测标本采集手册》《ABO及RhD血型鉴定试验标准操作规程》《不规则抗体筛查试验标准操作规程》《交叉配血试验标准操作规程》。 (四）仪器设备性能参数
ORTHOAutoVue lnnova全自动血型配血系统性能指标见仪器使用说明书。 （五)仪器设备环境要求与使用安全措施 1.仪器设备环境要求
(1）空间安装要求:①将ORTHO Au—To Vue Innova全自动血型配血分析系统安放在通风良好、灰尘少的地方.避免在过热或过冷以及日光直射的环境中。②对于仪器的安装场所应该能够满足设备以下的参数要求：设备尺寸：75cm（深）× 92cm（高)×140cm(宽）；设备重量:230kg，应确保拟安装Ortho AutoVue lnnova全自动血型配血分析系统的工作台能够安全地支撑设备的总重量。
(2)运行条件:为保证仪器的正常运行，仪器必须在满足下列各条件并维持相应环境的情况下使用：①操作／环境温度：18～30℃；②操作相对湿度:20%～95%;③必须配备不间断电源(UPS),确保系统在断电的情况下能够完成试验;④电压:（100～120)／（200~240)VAC；⑤频率：50／60Hz；⑥功率：520VA；⑦保
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险丝：2×5.0 AT／250V(延时）。
2.仪器安全
(1)ORTHO AutoVue lnnova全自动血型配血分析系统要求使用上述指定类型的交流电源。必须由熟悉电气工程安全并经过适当培训的人员执行设备的外部连接和电源连接。
(2）在发生有任何液体溅入到仪器中的情况时，必须将该仪器与电源断开，进行清洗并消毒.
（3）仪器设备使用前，必须认真检查设备之间连接及外接线（件)是否正确、正常，电源插头是否正确插接，设备是否处于正常状态。试验过程中如遇水、电故障或中断，应立即关闭影响仪器设备安全的有关开关，并实施安全保护措施. （4）该仪器只能由负责人、操作员和经过认证的技术员来使用。 (5)仪器设备的运输必须按仪器操作手册规定进行搬运,禁止鲁莽装卸，应避免倾斜,振动和碰撞. 3。人员安全
（1）如果未按制造商指定的方式使用本设备,则可能会削弱设备提供的保护功能。ORTHO AutoVue lnnova全自动血型及配血分析系统只能由Ortho-Clinical Diagnos-tics授权人员进行安装和维修.
（2）所有血液样本及与血液有接触的材料均视为传染性物质。操作ORTHO Au—toVuelnnova全自动血型及配血分析系统时,应始终佩戴橡胶手套和眼部／面部防溅保护装备。
（3）当对设备进行清洁或清除污染、处理样本、处置废弃试剂卡、处理稀释板及所有系统液体连接管路和容器时,应遵照标准实验室生物危害注意事项。 （4)在处理废弃样本或组装／拆卸组合零件时不可直接接触废弃物，一定要戴手套和护目镜以避免直接接触。如果操作人员不小心接触到血液、试剂、废弃物／皮肤或衣物上沾到了样品、试剂及废液时,立即按照《实验室职业暴露预防与处置管理制度》进行处理. （六）每日开关机程序 1。开机程序’
（1）打开仪器右侧电源，打开电脑，点击OCD，输入密码OCD,进入Windows.
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(2)系统自动弹出INNOVA-LIS界面，点击Start按钮。
（3）双击桌面上AutoVue lnnova图标，启动软件，输入用户名及密码，登录到常规模式，等待系统初始化.
(4）待初始化完成后，按“维护”按钮进入维护界面,按提示步骤进行相关维护操作。
2。关机操作程序 检查是否已经卸载了样本和试剂，确认做完每日维护，并进行数据备份后点击关机,待试剂卡抽屉自动弹出,确认，退出AutoVue lnnova软件，关闭IN—NOVA-LIS程序，关闭电脑,关闭AutoVuelnnova仪器电源。 （七）仪器校准程序
参见下述第（十）条仪器设备维护保养程序中的相关要求。 (八)质控分析程序
1.室内质控频次要求 质控试验应该在每天常规试验开始前进行，试验中途更换试剂批号后应重做质控试验。
2。质控品选择基本要求 参照《输血相容性检测室内质量控制管理制度》中关于过程控制的相关要求.
3.质控操作与结果分析 质控标本和常规患者标本的检测方法应一致，并由同一人完成。质控结果在控制范围之内才能进行常规检测结果的报告和血液发放。失控的质控结果应找到根本原因并及时纠正，必要时应对标本进行重复检测后才能确认报告和发放血液。 (九）常规标本检测程序 1.装载试剂
（1）注册试剂:①点击非OCD试剂或不带条码的试剂所属的或其同等的OCD试剂盒例如，点击新建批次按钮,显示批次创建对话框；②键入一个批号并点击验证按钮，再次键入批号以确认输入,然后再次点击验证按钮；③点击下一步按钮，键入一个失效日期,或从日历中选择一个日期,然后点击下一步按钮；④为试剂盒中包括的组成试剂键入条码，然后点击验证按钮；⑤点击结束按钮，点击确定以保存该批次信息;⑥在可用批次列表中点击该批号以显示批次详情对话框,点击常规状态字段并选择可用,点击确定按钮以保存该批次信息.
（2）装载试剂：①液体试剂自动条码装载：打开主舱门，装入试剂盘,放置
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稀释板，关闭主舱门，仪器开始扫描试剂并自动检测试剂量;②液体试剂自定义装载：打开主舱门，装入试剂盘或NAA，放置稀释板，关闭主舱门，仪器开始扫描试剂，再次打开主舱门，定义相应位置的试剂种类，关闭主舱门，仪器扫描试剂并自动检测试剂量；③试剂卡的装载:打开抽屉，按需要补充试剂卡，关闭抽屉,仪器自动扫描试剂卡。 2.条码样本检测操作步骤
(1）血型／抗体筛查：①点击样本菜单，点击注册／装载,选择注册(如需输入患者信息选择病人信息），在试验组处选择检测项目;②扫描标本条形码，如需输入病人信息，输入病人信息后，点击添加到列表，继续编辑下一个标本，全部编辑完成后，点击发送到工作列表；③打开样本舱门,将样本放置到仪器上，关闭样本舱门，仪器开始相关检测项目。
（2）交叉配血：①点击样本菜单,点击注册／装载，选择注册(如需输入患者信息选择病人信息），在试验组处选择项目;②扫描标本条形码（如必要可以输入病人相关信息），点击新献血员，扫描献血员条形码，确定,点击添加到列表，继续编辑下一个标本，全部编辑完成后,点击发送到工作列表;③打开样本舱门,将样本放置到仪器上,关闭样本舱门，仪器开始运行标本。 3。无条码样本（自定义装载位置）检测操作步骤
(1）血型／抗体筛查：①打开样本舱门,点击样本菜单，点击注册／装载,选择注册和指定位置（如需输入患者信息选择病人信息)。②在试验组处选择项目，输入样本编号(如需输入病人信息,输入病人信息)，在样本转子上选择样本架位，点击添加到列表，继续编辑下一个标本，全部编辑完成后,点击发送到工作列表。③将样本放置到仪器上，关闭样本舱门，仪器开始运行标本。
（2)交叉配血:①打开样本舱门,点击样本菜单,点击注册／装载，选择注册和指定位置(如需输入患者信息选择病人信息）.②在试验组处选择项目，手工输入样本编号（如需输入病人信息，输入病人信息），点击新献血员,输入献血员样本编号，确定。在样本转子上选择样本架位,点击添加到列表，然后在样本转子上给供血者样本指定架位，点击添加到列表，继续编辑下一个标本，全部编辑完成后，点击发送到工作列表。③将样本放置到仪器上，关闭样本舱门，仪器开始运行标本。
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4。结果判读
(1）一旦AutoVue已阅读试剂卡，即将对其进行评级和判定。 （2)系统将拒绝接收未成功评级的试验结果(不确定、MF、H／I等)。 5。结果查询
(1）查看工作列表：①可从样本或结果屏幕上访问工作列表。②选择工作列表复选框以查看下列状态的工作列表和样本：已请求的试验；正在进行中的常规试验进程；已结束，且结果尚未被接受或拒绝的常规试验进程；已经接受但尚未传输的结果。
（2）选择已完成工作列表复选框以查看下列状态的样本的结果列表：①试验已完成,并已传输的结果；②结果已被取消、编辑、接受或拒绝，并已传输的结果。
6.接受或拒绝结果
（1）在工作列表选项卡上,选择工作列表复选框。 (2)点击一下样本标志号，进入试验组详情对话框。 (3）点击接受按钮，接受结果。 (4）点击拒绝按钮，拒绝结果。 7。结果编辑
(1)编辑整体试验结果:①在工作列表选项卡上，选择工作列表复选框；②点击一下样本标志号，进入试验组详情对话框；③点击编辑结果按钮;④输入有效结果值，然后点击验证按钮，AutoVue将更新结果值。
（2)编辑反应孔试验结果：①在工作列表选项卡上，选择工作列表复选框；②点击一下样本标志号，进入试验组详情对话框;③点击编辑反应孔结果按钮；④扫描待编辑试剂卡条码；⑤选择一个反应孔，在反应孔结果对话框中编辑该反应孔的结果；⑥点击计算,系统将重新计算整体结果；⑦点击验证按钮,系统将对新生成的结果进行确认。 8.数据传输
（1）双击\"AutoVue检验仪器通信接口”（雷达图标)，若右下方任务栏显示红蓝相间的圆饼状图标，则为“检验仪器通信接口\"已打开。
（2）进入AutoVue操作界面，在“结果”状态下,将“工作列表”中的试验结果
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进行判读、验证并接受结果。
(3）单击右侧“传输”按钮，进入“传输模式”菜单,选择所需传输结果，单击“确定”，完成数据传输。
（4）注意事项:①传输完成后，应于配发血系统检查传输是否成功，若传输失败需重复传输；②若所检测样本标本号与输血申请单上标本号不一致，则数据无法传输；③进行数据传输前，务必将检验仪器通信接口软件打开，否则数据不能传输。
(十）仪器设备维护保养程序 1。日维护
（1)点击维护，执行“消除吸头污染”项目,按照提示步骤操作即可。 （2)清空废弃物容器中的废弃试剂卡。 （3）根据需要灌注液体容器。 （4)执行数据备份. 2。周维护
（1）执行每日维护步骤.
(2)点击维护，执行“试液回路清除污染”，按照提示步骤操作即可. （3)点击维护,执行“设备清洁”,按照提示步骤操作即可。
（4）点击维护，执行“自动读取器质控”，按照提示步骤操作即可。 3.半年维护校准
(1）点击维护,执行“移液器位置质控\按照提示步骤操作即可(执行条件：每过6个月或每次移动导管或探针时）。
(2)点击维护，执行“移液量质控”.在选项中勾选第一个“执行移液量质控”并且点击“确认”，按照提示步骤操作即可(执行条件：每过6个月或每次移动导管或探针时).
(3）孵育器质控（仅限OCD维护人员执行)。 （4)离心机质控(仅限OCD维护人员执行）。 （5）打孔器清除污染(仅限OCD维护人员执行)。 4。按需维护 根据需要执行以下维护步骤：
（1)设备管理冲洗:①下列情况时,需对系统进行清洗：仪器已闲置1小时和
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更长时间;操作员收到错误消息时。②AutoVue提供四种不同方式以便冲洗设备管路和液体系统：生理盐水；去离子水；氢氧化钠和生理盐水；氢氧化钠和去离子水.
(2)更换移液器探针和导管：当探针已经明显损坏时，执行该步骤. (十一)试剂更换
检测过程中出现试剂量不足时,根据检测系统报警信息更换相应试剂.更换试剂红细胞时还需要重新执行室内质控程序. (十二）仪器退役前的处理
1.仪器表面消毒 用0.2％～1.0％的次氯酸钠溶液对仪器表面进行消毒处理。
2.仪器内部消毒 使用2％～3％的次氯酸钠溶液气雾胶对仪器内部进行消毒处理。
3。管路消毒 用2％~3％的次氯酸钠溶液对仪器管道进行消毒处理.如果仪器已经不能正常使用时，只对部分可能的管道用2%~3％的次氯酸钠溶液进行浸泡处理.
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