３５２８ 利Ｅ医药２０１１年１２月第３３卷第２３期Ｈｅｂｅｉ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ，２０１１，Ｖｏｌ ３３ Ｄｅｃ Ｎｏ．２３ ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００２－７３８６．２０１１．２３．００２ ・论著・ 骨髓间充质干细胞对与平滑肌细胞共培养体系中 细胞增殖和自身分化的影响 瞿海龙陈晓春张冰邹云增 【摘要】 目的探讨骨髓间充质干细胞（ｍａ￣ｏｗ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ，ＭＳＣｓ）对联合培养细胞增殖 及自身表达平滑肌肌动蛋白（ｓｍｏｏｔｈ ｍｕｓｃｌｅ ａｌｐｈａ—ａｃｔｉｎ，ｏｔ—ａｃｔｉｎ ＳＭ）的影响。方法 建立ＭＳＣｓ与平滑肌细 胞（ｓｍｏｏｔｈ ｍｕｓｃｌｅ ｃｅｌｌｓ，ＳＭＣｓ）直接共培养体系，对ＭＳＣｓ与ＳＭｃｓ直接共培养纽和单纯ｓＭＣｓ纽及ＭＳＣｓ组 在不同时间点细胞计数。对共培养组和单纯ＭＳＣｓ组行４’６’．二乙酰基一２一苯基吲哚（ＤＡＰＩ）（５ ｎｇ／ｍ１）标 记，利用抗ｄ—ａｃｔｉｎ ＳＭ荧光抗体，检测２组ＭＳＣｓ胞浆内．ａｃｔｉｎ ＳＭ表达。结果 共培养组细胞计数较单独 ＳＭＣｓ培养组明显减少，以第４天为著（Ｐ＜０．０１），与ＳＭＣｓ共培养５ ｄ，ＭＳＣｓ在共培养组较单纯ＭＳＣｓ组 表达 —ａｃｔｉｎ ＳＭ阳性率明显降低（Ｐ＜０．０５）。结论在无干预因素情况下，ＭＳＣｓ与ＳＭＣｓ直接共培养明 显抑制共培养体系中细胞增殖，且抑制ＭＳＣｓ表达 一ａｃｔｉｎ ＳＭ。 【关键词】 骨髓间充质干细胞；平滑肌细胞；共培养；增殖；分化 【中图分类号】 Ｒ ３２９．３ 【文献标识码】Ａ 【文章编号】 １００２—７３８６（２０１１）２３—３５２８—０３ Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ ｏｆ ｍａｒｒｏｗ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ｏｎ ｃｅｌｌ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｓｅｌｆ ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｉｎ ａ ｄｉｒｅｃｔ ｃｏ－ｃｕｌｔｕｒｅ ｓｙｓｔｅｍ ｗｉｔｈ ｓｍｏｏｔｈ ｍｕｓｃｌｅ ｃｅｌｌ Ｑｕ Ｈａｉｌｏｎｇ ，ＣＨＥＮ Ｘｉａｏｃｈｕｎ，ＺＨＡＮＧ Ｂｉｎｇ ，ｅｔ ａ１． Ｅｍｅｒｇｅｎｃｙ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ，Ａｆｉｌｆｉａｔｅｄ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆＨｅｂｅｉ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｈｅｂｅｉ，Ｂａｏｄｉｎｇ ０７１０００，Ｃｈｉｎａ 【Ａｂｓｔｒａｃｔ ｌ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ ｏｆ ｍａｒＦｏｗ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ（ＭＳＣｓ）ｏｎ ｃｅｌｌ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｓｅｌｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｉｎ ａ ｃｏ—ｃｕｌｔｕｒｅ ｓｙｓｔｅｍ ｗｉｔｈ ｓｍｏｏｔｈ ｍｕｓｃｌｅ ｃｅｌｌ（ＳＭＣｓ）ａｎｄ ｓｅｌｆ－ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｓｍｏｏｔｈ ｍｕｓｃｌｅ ａｌｐｈａ—ａｃｔｉｎ（０【一ａｃｔｉｎ ＳＭ）．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｔｈｅ ｄｉｒｅｃｔ ｃｏ—ｃｕｌｔｕｒｅ ｓｙｓｔｅｍ ｏｆ ＭＳＣｓ ｗｉｔｈ ＳＭＣｓ ｗａｓ ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ，ａｎｄ ｔｈｅ ｃｅｌｌ ｃｏｕｎｔ ｗａｓ ｐｅｒｆｏｒｍｅｄ ｉｎ ｃｏ—ｃｕｌｔｕｒｅ ｇｒｏｕｐ，ｓｉｍｐｌｅ ＳＭＣｓ ｇｒｏｕｐ ａｎｄ ｓｉｍｐｌｅ ＭＳＣｓ ｇｒｏｕｐ ａｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｔｉｍｅ ｐｏｉｎｔｓ．Ｔｈｅ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｃｏ—ｃｕｌｔｕｒｅ ｇｒｏｕｐ ａｎｄ ＭＳＣｓ ｇｒｏｕｐ ｗｅｒｅ ｐｒｅ—ｌａｂｌｅｄ ｂｙ ＤＡＰＩ（５ｎ ｍ１），ａｎｄ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｏｔ—ａｃｔｉｎ ＳＭ ｗａｓ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｗｉｔｈ ａｎｔｉ—ｏｔ—ａｃｔｉｎ ＳＭ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｂｙ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｉｍｍｕｎｏｃｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｆｏｒ ｂｏｔｈ ｒｏｕｐｓ．Ｒｅｓｕｌｔｇｓ Ｔｈｅ ｃｅｌｌ ｃｏｕｎｔｓ ｉｎ ｄｉｒｅｃｔ ｃｏ—ｃｕｈｕｒｅ ｇｒｏｕｐ ｗｅｒｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｌｏｗｅｒ ｔｈａｎ ｔｈｏｓｅ ｉｎ ｓｉｍｐｌｅ ＳＭＣｓ ｇｒｏｕｐ，ｅｓｐｅｃｉａｌｌｙ ｏｎ ｔｈｅ ４ｔｈ ｄａｙ（１．６９ ｘ １０ ／ｍｌ ｖｓ ２７．２０×１０ ／ｍｌ，Ｐ＜０．Ｏ】），ａｆｔｅｒ ５－ｄａｙ ｃｏ—ｃｕｌｔｕｒｅ ｗｉｔｈ ＳＭＣｓ，ｔｈｅ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｒａｔｅ ｏｆ ｄ—ａｃｔｉｎ ＳＭ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＭＳＣｓ ｉｎ ｃｏ－ｃｕｌｔｕｒｅ ｇｒｏｕｐ ｗａｓ ｏｂｖｉｏｕｓｌｙ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ，ａｓ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈａｔ ｉｎ ｓｉｍｐｌｅ ＭＳＣｓ ｇｒｏｕｐ（４４．１％ｖｓ ２６．６％，Ｐ＜０．０５）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ ＭＳＣｓ ｉｎ ｔｈｅ ｄｉｒｅｃｔ ｃｏ—ｃｕｌｔｕｒｅ ｓｙｓｔｅｍ ｗｉｔｈ ＳＭＣｓ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｃａｎ ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔｌｙ ｉｎｈｉｂｉｔ ｃｅｌｌ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｒｅｄｕｃｅ ｔｈｅ ｄ—ａｃｔｉｎ ＳＭ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＭＳＣｓ，ｉｆ ｔｈｅｒｅ ｉｓ ｎｏ ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ． 【Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ】 ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ；ｓｍｏｏｔｈ ｍｕｓｃｌｅ ｃｅｌｌｓ；ｃｏ—ｃｕｌｔｕｒｅ；ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ；ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ 骨髓间充质干细胞具有强大的增殖能力和多向分化潜能， 在一定条件诱导下，可向心肌细胞、成骨细胞、脂肪细胞、神经 元细胞、内皮细胞等方向定向分化 ，修复受损组织。但在无 Ｎｅｏｍａｒｋｅｒ公司提供；山羊抗小鼠的ＴＲＩＴＣ标记的ＩｇＧ由北京中 杉公司提供；ＦＩＴＣ标记的小鼠抗大鼠ＣＤ９０抗体和ＣＤ３４抗体分 别由ＢＤ公司和Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚｅ公司提供；４’６’一二乙酰基．２一苯基吲 哚（４’６’一Ｄｉａｍｉｄｉｎｏ－２一ｐｈｅｎｙｌｉｎｄｏｌｅ，ＤＡＰＩ）由Ｓｉｇｍａ公司提供。 １．２实验方法 刺激因素诱导情况下，与其他细胞直接接触生长，其增殖能力 和分化情况如何，报道较少。本实验通过对ＭＳＣｓ与主动脉 ＳＭＣｓ进行体外直接共培养，观察ＭＳＣｓ对细胞增殖及自身向平 滑肌方向分化的影响。 １资料与方法 １．１ 主要材料与试剂胎牛血清、低糖型ＤＭＥＭ粉剂、ＰＢＳ粉 剂、胰蛋白酶由Ｇｉｂｃｏ公司提供；小鼠抗大鼠ＯＬ．ＳＭ．ａｃｔｉｎ抗体由 １．２．１ ＭＳＣｓ和ＳＭＣｓ培养鉴定：健康ＳＤ大鼠４只，雌雄不限， 体重１６０～２００ ｇ，由复旦大学中山医院实验动物中心提供，大 鼠ＭＳＣｓ培养采用全骨髓贴壁法，Ｐ３－５代用于实验。应用流式 细胞仪对ＭＳＣｓ的表面分子ＣＤ３４、ＣＤ９０进行鉴定。大鼠主动 脉ＳＭＣｓ培养采用组织块贴壁法，Ｐ３—５代细胞用实验。 １．２．２ ＭＳＣｓ对共培养细胞增殖的影响：共培养组分别以 ＭＳＣｓ（５×１０ ）和ＳＭＣｓ（５×１０ ）／孔，单纯ＳＭＣｓ组和ＭＳＣｓ组 细胞数（１０ ）／孔进行２４孑Ｌ板铺板，用含１０％胎牛血清的 ＤＭＥＭ培养液孵育，不同时间点进行细胞计数，每组复孔，实验 作者单位：０７１０００河北省保定市，河北大学附属医院急诊科（瞿 海龙、张冰）；内蒙古自治区医学院第ｉ附属医院（陈晓春）；复旦大学附 属中山医院心研所（邹云增） 医药２０１ １年１２月第３３卷第２３期重复３次。 Ｈｅｂｅｉ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ。２０１１，Ｖｏ１ ３３ Ｄｅｃ Ｎｏ．２３ ３５２９ １．２．３ ＭＳＣｓ对与ＳＭＣｓ共培养体系中自身分化的影响：将 ＭＳＣｓ用ＤＡＰＩ（５ ｎｇ／ｍ１）３７￣Ｃ孵育３０ ｍｉｎ，与ＳＭＣｓ共培养组以 ＭＳＣｓ（５ ｘ １０ ）、ＳＭＣｓ（５×１０ ）／孔和单纯ＭＳＣｓ组１０ ／孔细胞 数加到内置盖玻片的２４孑Ｌ板中避光培养５ ｄ，细胞爬片用４％ ＿＿■ 多聚甲醛固定，应用免疫组化的方法检测０／．一ａｃｔｉｎ ＳＭ的表达。 图２细胞核呈蓝色 图３ 单纯ＭＳＣｓ培 图４ ＤＡＰＩ标记的 随机计数５—６个高倍视野，统计发蓝色荧光ＤＡＰＩ标记的细胞 荧光为ＭＳＣ， 养 ａｃｔｉｎ ＳＭ ＭＳＣｓ与ＳＭＣｓ 胞浆中发出红 阳性表达 共培养５日后 核数量，以及其胞浆中发红色荧光仪。ａｃｔｉｎ ＳＭ阳性表达的细胞 色荧光为ａ． ２００； 胞浆表达ｄ 数量，并计算ＤＡＰＩ标记ＭＳＣｓ中 ．ａｅｔｉｎ ＳＭ的阳性表达率，每 ａｃｔｉｎ ＳＭ阳性 ａｃｔｉｎ ＳＭ阳性 组复孔，实验重复３次。 表达×４００： 表达ｘ２００ １．３统计学分析应用ＳＰＳＳ １１．５统计软件，计量资料以ｉ±Ｓ 髓中除为各种血细胞生长提供适宜的微环境外，而本身还具有 表示，组间比较采用单因素方差分析和ｔ检验，计数资料采用 多向分化潜能，可向中胚层起源的各种细胞分化，然而有关其 ）（２检验，Ｐ＜０．０５为差异有统计学意义。 跨系分化的机制尚未清楚。本实验通过对体外ＭＳＣｓ与主动脉 ２结果 ＳＭＣｓ直接共培养，在无刺激因素诱导情况下，观察ＭＳＣｓ对细 ２．１ ＭＳＣｓ的形态及分子表型特征 细胞接种后２４ ｈ，可见少 胞增殖和自身向平滑肌方向分化的影响。实验结果表明，ＭＳＣｓ 量细胞开始贴壁生长，呈成纤维状，而大部分细胞呈圆形悬浮 在无诱导条件存在的情况下，自身表达平滑肌早期特异性标志 于培养基中，细胞生长缓慢，２—３ ｄ后增殖加快，７ ｄ左右达融 ・ａｃｔｉｎ ＳＭ，其阳性率为４４．１％，ＭＳＣｓ与ＳＭＣｓ共培养后，ＭＳＣｓ 合。通过多次换液去除骨髓中大量非ＭＳＣｓ细胞，Ｐ２—３代 的０【一ａｃｔｉｎ ＳＭ阳性表达下降，为２６．６％。Ｋａｓｈｉｗａｋｕｒａ等 研究 ＭＳＣＳ呈较均一的长梭形，ＣＤ９０表达率为９２．５％，ＣＤ３４表达率 认为ＭＳＣｓ中存在一种Ａｄ（Ｇ）细胞，这类细胞注定要在以后的 为０．２１％。见图１。 生长过程中分化为ＳＭＣｓ，可能为平滑肌祖细胞。而苗莉等 窖 ｌ 嚣 研究发现，单独培养下的ＭＳＣｓ虽高表达０【－ａｃｔｉｎ ＳＭ，但并不表 达ＳＭＣｓ的肌钙样蛋白ｃａｌｐｏｎｉｎ，即在随后的培养中不能分化成 窖 堂 收缩型ＳＭＣｓ。与平滑肌细胞共培养的ＭＳＣｓ．虽０【一ａｃｔｉｎ ＳＭ阳 ｅＤ３ｄＦ ｒｆ 图１ ＭＳＣＳ分子表型特征 性表达下降，但却有肌钙样蛋白ｃａｌｐｏｎｉｎ表达，且形态学出现 肌丝样结构，能够进一步向ＳＭＣｓ分化，因此认为细胞间的接触 ２．２ ＳＭＣｓ的形态特征血管块贴壁后４～６ ｄ可见细胞爬出， 呈长梭形。１０ ｄ左右细胞生长达８０％融合，消化传代。传代后 是ＭＳＣｓ向ＳＭＣｓ分化的重要因素。本实验还发现，ＭＳＣｓ与 细胞生长速度加快，形态变宽，呈“峰．谷样”生长。经ＡＢＣ法 ＳＭＣｓ共培养后，细胞增殖明显受到抑制。陈健琳等 应用 免疫组织化学染色ＤＡＢ显色，０【－ａｃｔｉｎ表达阳性的细胞胞浆呈 ＭＳＣｓ与Ｔ淋巴细胞共培养，发现通过自分泌ＴＧＦＩ３ 抑制细胞 棕黄色，随机计数５个高倍视野，计算细胞阳性率达９５％以上。 的生长和活化作用，进而抑制淋巴细胞的反应性。本实验中， ２．３ ＭＳＣｓ对细胞增殖影响 与ＳＭＣｓ共培养组细胞计数较单 是否也通过相同的机制抑制了共培养体系中细胞的增殖仍需 独ＳＭＣｓ培养组明显减少，以第４天为著，差异有统计学意义 进一步研究。 （Ｐ＜０．０１），共培养组细胞计数虽低于单纯ＭＳＣｓ组，但差异 有体内实验表明，血管内皮受损后，骨髓来源的ＭＳＣｓ在细 无统计学意义（Ｐ＞０．０５）。见表１。 胞因子的诱导下，可归巢到受损血管局部，分化为血管平滑肌 表１ ３组细胞在不同时间的细胞计数×１０ ／ｍｌ， ±ｓ 细胞并在局部增生，参与了动脉粥样硬化或再狭窄的形成 Ｊ。 也有研究表明，ＭＳＣｓ可分化为内皮细胞，加速受损内皮修复， 可抑制动脉粥样硬化的形成 。该实验研究显示，ＭＳＣｓ与 ＳＭＣｓ直接接触下，可向平滑肌细胞分化，而抑制共培养体系中 细胞的增殖，其对动脉粥样硬化的确切作用有待进一步研究 注：与第４天比较， Ｐ＜０．Ｏｌ 证实。 ２．４ ＭＳＣｓ对细胞分化影响荧光显微镜下单纯ＭＳＣｓ培养组 参考文献 与共培养组均可见胞核为蓝色、胞浆呈红色的肌纤维状细胞， １ Ｓａｒｒａｆ ＣＥ，Ｏｔｔｏ ＷＲ，Ｅａｓｔｗｏｏｄ Ｍ．Ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ｄｉｆｆｅｒ－ ｅｎｔｉａｔｉｏｎ ａｆｔｅｒ ｍｅｃｈａｎｉｃａｌ ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ．Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｌｉｆ，２０１ １，４４：９９．１０８． 表明ＭＳＣｓ可表达平滑肌细胞早期分化标志Ｏ／．一ａｃｔｉｎ ＳＭ。单纯 ２ Ｃｏｈｅｎ Ｊ，Ｚａｌｅｓｋｉ ＫＬ，Ｎｏｕｒｉｓｓａｔ Ｇ，ｅｔ ａ１．Ｓｕｒｖｉｖａｌ ｏｆ ｐｏｒｃｉｎｅ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ＭＳＣｓ培养组仪．ａｃｔｉｎ ＳＭ阳性率为４４．１％，而共培养组ＭＳＣｓ阳 ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ｏｖｅｒ ｔｈｅ ａｌｇｉｎａｔｅ ｒｅｃｏｖｅｒｅｄ ｃｅｌｌｕｌａｒ ｍｅｔｈｏｄ．Ｊ Ｂｉｏｍｅｄ Ｍａｔｅｒ 性分化率为２６．６％，２组差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。见图 Ｒｅｓ Ａ，２０１１，９６：９３－９９． ３ Ｋａｓｈｉｗａｋｕｒａ Ｙ，Ｋａｔｏｈ Ｙ，Ｔａｍａｙｏｓｅ Ｋ，ｅｔ ａ１．Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ １—４。 ｓｔｒｏｍａｌ ｃｅｌｌ—ｄｅｒｉｖｅｄ ｓｍｏｏｔｈ ｍｕｓｃｌｅ ＣｅＨｓ ｂｙ ａ ｈｕｍａｎ ＳＭ２２ａｌｐｈａ ｐｒｏｍｏｔ— ３讨论 ｅｒ；ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｕｔａｔｉｖｅ ｓｍｏｏｔｈ ｍｕｓｃｌｅ ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ ｃｅｌｌｓ ｏｆ ＭＳＣｓ是一类不同于造血干细胞的特殊类型的细胞，在骨 ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，２００３，１０７：２０７８－２０８１． ４苗莉，何国祥，景涛，等．观察大鼠血管平滑肌细胞与问充质干细胞 ３５３０ 河北医药２０１１年１２月第３３卷第２３期Ｈｅｂｅｉ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ，２０１１。Ｖｏｌ ３３ Ｄｅｃ Ｎｏ．２３ 直接接触培养对细胞的诱导分化．第三军医大学学报，２００７，２９：８１４． ８１６． 脉血管成形术后再狭窄程度．中华心血管病杂志，２００７，３５：８０２￣０６． ７ “Ｍ，Ｙｕ Ｊ．Ｌｉ Ｙ，ｅｔ ａ１．ＣＸＣＲ；ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒｓ ｄｅｉｒｖｅｄ ｆｒｏｍ ｂｏｎｅ ｍｅｓｅｎ— ｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅ ｉｎｔｏ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉ￣ｃｅｌｌｓ ｃａｐａｂｌｅ ｏｆ ｖａｓｃｕｌａｒ ５陈健琳，冯凯，郭子宽，等．骨髓间充质干细胞抑制异体Ｔ淋巴细胞 反应的实验研究．中华血液学杂志，２００５，２６：７４０－７４２． ６陈晓春，单鸿伟，瞿海龙，等．骨髓间充质干细胞移植加重大鼠主动 ｒｅｐａｉｒ ａｆｔｅｒ ａｒｔｅｒｉａｌ ｉｎｊｕｒｙ．Ｃｅｌｌ Ｒｅｐｒｏｇｒａｍ，２０１０，１２：４０５－４１５． （收稿日期：２０１１—０１一ｌ２） ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００２—７３８６．２０１１．２３．００３ ・论著・ 腓骨肌萎缩症１型和２型的临床与基因突变特点 郭鹏 张保刚 王相斌 宋福聪 冯文霞唐北沙夏昆 【摘要】 目的探讨腓骨肌萎缩症（ＣＭＴ）１型和２型患者的临床与基因突变的特点。方法对临床 诊断为ＣＭＴＩ型和ＣＭＴ２型９１个家系先证者的临床表现、电生理和病理特点进行回顾性分析，并进行 ＰＭＰ２２的大片段重复突变和ＰＭＰ２２、ＭＰＺ、ＳＩＭＰＬＥ、ＥＧＲ２、ＲＡＢ７、ＮＥＦＬ、ＭＦＮ２、Ｈｓ．ｐ２７及ＨｓＤ２２基因突变 分析。结果ＣＭＴ１起病较早，临床表现多见起始于下肌远端的无力萎缩，伴感觉缺失，神经系统检查可见 小腿肌肉明显萎缩，膝、踝反射减低或消失，弓形足，神经电生理检查示神经传导速度减慢，病理改变可见 髓鞘脱失，基因突变分析发现ＰＭＰ２２的大片段重复突变和ＭＰＺ基因突变；ＣＭ３＂２发病率较ＣＭＴ１低．发病 年龄比ＣＭＴ１较迟，临床症状与ＣＭＴ１相比，运动系统受累较感觉系统更明显，神经传导速度常在正常范 围，病理改变呈轴索变性，基因突变分析发现ＭＦＮ２、Ｈｓｐ２７及Ｈｓｐ２２基因突变。结论ＣＭＴ１与ＣＭＴ２临 床表现不同，基因突变分析结果与临床特点一致，准确性高、损伤小，可早期诊断，值广泛应用于临床，特别 是有家族史的患者或高危亲属。 【关键词】腓骨肌萎缩症；临床；突变分析 【中图分类号】 Ｒ ７４６．４ 【文献标识码】 Ａ 【文章编号】 １００２—７３８６（２０１１）２３—３５３０—０３ Ｃｌｉｎｉｃａｌ ｆｅａｔｕｒｅｓ ａｎｄ ｇｅｎｅ ｍｕｔａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ Ｃｈａｒｃｏｔ－Ｍａｒｉｅ－Ｔｏｏｔｈ ｄｉｓｅａｓｅ ｔｙｐｅ １ ａｎｄ ｔｙｐｅ ２ ＧＵＯ Ｐｅｎｇ，ＺＨＡＮＧ Ｂａｏｇａｎｇ，ＷＡＮＧ Ｘｉａｎｇｂｉｎ，ｅｔ ａ１．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆＮｅｕｒｏｌｏｇｙ，Ｃｅｎｔｒａｌ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆＨａｎｄａｎ Ｃｉｔｙ， Ｈｅｂｅｉ，Ｈａｎｄａｎ ０５６００１，Ｃｈｉｎａ 【Ａｂｓｔｒａｃｔ】 Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ｃｌｉｎｉｃｌａ ａｎｄ ｇｅｎｅｔｉｃ ｍｕｔａｔｉｏｎ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ｏｆ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ Ｃｈａｒｃｏｔ—Ｍａｒｉｅ—Ｔｏｏｔｈ ｄｉｓｅａｓｅ ｔｙｐｅ １ ａｎｄ ｔｙｐｅ ２．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｔｈｅ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｍａｎｉｆｅｓｔａｔｉｏｎｓ，ｅｌｅｃｔｍｐｈｙｓｉ０ｌｏｇｉｃａ１ ａｎｄ ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ｗｅｒｅ ｒｅｔｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ ａｎａｌｙｚｅｄ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ Ｃｈａｒｃｏｔ—Ｍａｒｉｅ．Ｔｏｏｔｈ（ＣＭＴ）ｄｉｓｅａｓｅ ｔｙｐｅ １ ａｎｄ ｔｙｐｅ ２ ａｎｄ ９１ ＣＭＴ ｐｅｄｉｇｒｅｅｓ，ａｎｄ ｔｈｅ ＰＭＰ２２ ｌａｒｇｅ ｆｒａｇｍｅｎｔ ｄｕｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｍｕｔａｔｉｏｎ ａｎｄ ｔｈｅ ｇｅｎｅ ｍｕｔａｔｉｏｎ ｏｆ ＰＭＰ２２，ＭＰＺ，ＳＩＭＰＬＥ，ＥＧＲ２，ＲＡＢ７，ＮＥＦＬ，ＭＦＮ２，Ｈｓｐ２７，Ｈｓｐ２２ ｗｅｒｅ ａｎａｌｙｚｅｄ．Ｒｅｓｕｌｓｔ Ｔｈｅ ａｇｅ ｏｆ ｏｎｓｅｔ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ＣＭＴ １ ｗａｓ ｅａｒｌｉｅｒ，ａｎｄ ｍｏｓｔ ｆｒｅｑｕｅｎｔｌｙ ｆｉｒｓｔ ｓｙｍｐｔｏｍｓ ｗｅｒｅ ｗｅａｋｎｅｓｓ ａｎｄ ａｔｒｏｐｈｙ ｉｎ ｄｉｓｔａｌ ｅｎｄ ｏｆ ｌｏｗｅｒ ｌｉｍｂｓ ｗｉｔｈ ｈｙｐｅｓｔｈｅｓｉａ，ａｎｄ ｎｅｕｒｏｇｅｎｉｃ ｅｘａｍｉｎａｔｉｏｎ ｓｈｏｗｅｄ ｏｂｖｉｏｕｓ ａｔｒｏｐｈｙ ｉｎ ｌｅｇ ｍｕｓｃｌｅ ｗｉｔｈ ｗｅａｋｎｅｓｓ ｏｒ ｖａｎｉｓｈｉｎｇ ｏｆ ｒｅｆｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｋｎｅｅ ａｎｄ ａｎｋｌｅ，ａｎｄ ｔｈｅｒｅ ｗａｓ ｔａｌｉｐｅｓ ｃａｖｕｓ ｉｎ ａｌｌ ｔｈｅ ｐａｔｉｅｎｔｓ．Ｎｅｕｒｏ．ｅ１ｅｃｔｒ０ｐｈｙｓｉｏｌ０ｇｉｃａｌ ｅｘａｍｉｎａｔｉｏｎ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｎｅｒｖｅ ｃｏｎｄｕｃｔｉｏｎ ｖｅｌｏｃｉｔｙ ｗａｓ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ．Ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ ｅｘａｍｉｎａｔｉｏｎ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈｅ ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ ｃｈａｎｇｅｓ ｏｆ ｄｅｍｙｅｌｉｎａｔｉｏｎ，ａｎｄ ｇｅｎｅ ｍｕｔａｔｉｏｎ ａｎａｌｙｓｉｓ ｓｈｏｗｅｄ ｌａｒｇｅ ｆｒａｇｍｅｎｔ ｄｕｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｍｕｔａｔｉｏｎ ａｎｄ ｔｈｅ ＭＰＺ ｇｅｎｅ ｍｕｔａｔｉｏｎ，ｉｎ ｃｏｎｔｒａｓｔ ｔｏ ｔｈａｔ，ｔｈｅ ｉｎｃｉｄｅｎｃｅ ｏｆ ＣＭＴ１ ｗａｓ ｌｏｗｅｒ，ｔｈｅ ａｇｅ ｏｆ ｏｎｓｅｔ ｗａｓ ｌａｔｅｒ，ａｎｄ ｔｈｅ ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ ｃｈａｎｇｅｓ ｏｆ ｌｏｃｏｍｏｔｏｒ ｓｙｓｔｅｍ ｗｅｒｅ ｍｏｒｅ ｏｂｖｉｏｕｓ ｔｈａｎ ｔｈｏｓｅ ｉｎ ｓｅｎｓｉｎｇ ｓｙｓｔｅｍ，ｎｅｒｖｅ ｃｏｎｄｕｃｔｉｖｅ ｖｅｌｏｃｉｔｙ ｗａｓ ｗｉｔｈｉｎ ｎｏｒｍａｌ ｒａｎｇｅ，ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ ｃｈａｎｇｅｓ ｐｒｅｓｅｎｔｅｄ ａｘｏｎａｌ ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ，ａｎｄ ｇｅｎｅ ｍｕｔａｔｉｏｎ ａｎａｌｙｓｉｓ ｓｈｏｗｅｄ ｇｅｎｅ ｍｕｔａｔｉｏｎ ｉｎ ＭＦＮ２．Ｈｓｐ２７ａｎｄ Ｈ ｐ２２．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｔｈｅ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｍａｎｉｆｅｓｔａｔｉｏｎｓ ｏｆ ＣＭＴ１ ａｒｅ ｄｉｆｉｅｒｅｎｔ ｆｒｏｍ ｔｈｏｓｅ ｏｆ ＣＭＴ２，ａｎｄ ｔｈｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｒｅｓｕｌｔｓ ｆｏｒ ｇｅｎｅ ｍｕｔａｔｉｏｎ ａｒｅ ｃｏｉｎｃｉｄｅｎｔ ｗｉｔｈ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ，ｗｉｔｈ ｈｉｇｈ ａｃｃｕｒａｃｙ， ｌｉｔｔｌｅ ｉｎｊｕｒｙ，ｅａｒｌｉｅｒ ｄｉａｇｍｏｓｉｓ，ｗｈｉｃｈ ｉｓ ｗｏｒｔｈ ｂｅｉｎｇ ａｐｐｌｉｅｄ ｇｅｎｅｒａｌｌｙ ｉｎ ｃｌｉｎｉｃ，ｅｓｐｅｃｉａｌｌｙ ｆｏｒ ｔｈｅ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｆａｍｉｌｙ ｈｉｓｔｏｒｙ ｏｒ ｔｈｅｉｒ ｒｅｌａｔｉｖｅｓ ｗｉｔｈ ｈｉｇｈ ｒｉｓｋ ｆａｃｔｏｒｓ． 【Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ】 Ｃｈａｒｃｏｔ—Ｍａｒｉｅ－Ｔｏｏｔｈ ｄｉｓｅａｓｅ；ｃｌｉｎｉｃ；ｍｕｔａｔｉｏｎ ａｎａｌｙｓｉｓ 作者单位：０５６００１ 河北省邯郸市中心医院神经内科（郭鹏、张保 腓骨肌萎缩症（Ｃｈａｒｃｏｔ—Ｍａｒｉｅ—Ｔｏｏｔｈ ｄｉｓｅａｓｅ，ＣＭＴ）是一组 刚、王相斌、宋福聪、冯文霞）；中南大学湘雅医院神经内科（唐北沙）；中 最常见的具有高度临床和遗传异质性的周围神经单基因遗传 国医学遗传学国家重点实验室（夏昆） 病，遗传方式可为常染色体显性遗传、常染色体隐性遗传和ｘ