如何将DNA各模板浓度调至均一?
发布网友
共2个回答
热心网友
分光光度计测东西都这样
浓度太高超出线性范围,浓度太低容易被误差淹没
测出负值的话,先看看比色皿之间是不是有差异,都装水测一下李俊叶(站内联系TA)比色皿用的都是新的石英比色皿,应该不是比色皿的原因,比色皿中差不多要有3ml的量,这样稀释200倍就需要15微升的DNA,我是直接从活性污泥里提取DNA,提取量不是很大,所以想能不能把稀释倍数提高,但上次测定是负值,很是郁闷amisking(站内联系TA)你空白用什么做对照的?zhaohq1209(站内联系TA)用nanodrop测核酸浓度,只需要1ul即可,而且可以达到1000ng/ul也是比较准确的,plantaqp(站内联系TA)跑个琼脂糖胶估计一下比测得准ben1147(站内联系TA)Originally posted by 李俊叶 at 2010-07-18 16:53:32:
比色皿用的都是新的石英比色皿,应该不是比色皿的原因,比色皿中差不多要有3ml的量,这样稀释200倍就需要15微升的DNA,我是直接从活性污泥里提取DNA,提取量不是很大,所以想能不能把稀释倍数提高,但上次测定是负 ...比色皿新不新和有没有问题没有任何关系
质量差的比色皿,两只之间有个0.0几的吸光值差很正常,跟新旧无关
稀释倍数太大的话吸光值就很小,小于0.1就不太准,小于0.05一般认为没有参考意义的
3ml的太大了,浪费样品.找个核酸分析仪测,几微升就搞定
至少也要找个斜口的微量比色皿,几百微升就能装满,可以少稀释几倍,避免吸光值太小李俊叶(站内联系TA)实验室条件有限啊,只有那台老的紫外分光光度计,所以只能那样做啊,一般比色皿装多少量就可以测出来啊
热心网友
一般不去特意检测提取的得到的模板浓度，纯度倒是要注意一下，紫外分光达到1.8即可，不过我们一般也不去检测。
PCR的时候可以设置梯度，分别加0.5μl，1μl，1.5μl，2μl，2.5μl，3μl。
不要低于0.5μl，也不要高于3μl。选择几个梯度做一下看看哪个效果好就用哪个。有时候为了省钱，就直接用1μl上去P，一般问题不大，出了问题再回头做梯度也不迟。
