western blot转膜不完全怎么办？
发布网友
发布时间：2022-04-20 20:57
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热心网友
时间：2024-08-13 21:56
个人建议时间不要再长了，再长蛋白有可能变性造成后续实验无法进行。我原来遇到这类问题是用以下几种方法尝试解决的，你也可以尝试一下
（1）检查一下你的三明治结构夹的怎么样，尤其是膜及滤纸的边缘是不是有短接的地方，这个是最容易出现的问题。另外膜和胶之间是不是有气泡，不推荐用外力去擀压膜和胶，推荐用缓冲液润湿膜和胶之后，像做切片盖盖玻片一样从一边盖下赶出气体。要绝对确保没有短接和气泡，不然很容易出现转膜不完全的问题。
（2）换成恒压的试试，这个方案我不知道原理是什么，但是有的时候确实能够解决问题。
（3）换成半干转的方法，但是注意半干转更要确保没有短接气泡，而且时间不能过长，半干转的发热量很大。我不清楚你的蛋白是不是需要活性，如果遇热失活那就不能用这种方法。
（4）这个方法比较浪费，看老板让不让你用了。换成品缓冲液商品，西格玛的比较好。另外换24层滤纸成品，用一次不要再使用第二次。还有就是还一个牌子的膜，我们实验室曾经遇到过一个牌子的膜完全转不出来的现象。
以上，希望你的问题早日能够解决。
热心网友
时间：2024-08-13 21:52
转膜时间主要是看分子量，看看你的目的蛋白分子量是多少，还有就是我在转120KD的分子时，用时2h30min，胶上还有maker，但是用该膜做目的蛋白还是可以的。
