胚胎如何冷冻保存?
发布网友
共2个回答
热心网友
三步平衡法
（1）10%甘油保存液的配制
取9毫升20%羊血清的PBS，加入1毫升甘油，用吸管反复混合15～20次，经0.22微米滤器过滤到灭菌器内待用。
（2）取含20%羊血清0.3摩尔蔗糖的PBS 2毫升和3.5毫升，分别加入10%甘油3毫升和1.5毫升，配成含6%和3%甘油的蔗糖冷冻液。将3%、6%和10%三种甘油浓度的冷冻液分别装入小培养皿。
（3）胚胎分别在3%、6%和10%甘油的冷冻液中浸5分钟。
（4）胚胎装管
用0.25毫升塑料细管按以下顺序吸入，少量的10%甘油的PBS液、气泡、10%甘油的PBS液（含有胚胎）、气泡、少量的10%甘油的PBS液，加热封口两道（图9-18）。
图9-18 胚胎装管示意图
（5）塑料细管的编号
剪一段（2厘米）0.5毫升塑料细管作为标记外套，内装色纸，注明供体品种、耳号、胚胎发育阶段及等级、制作日期（年、月、日），并在外套管上写明序号备查。
（6）冷冻程序
将细管直接浸入冷冻仪的酒精浴槽内，以1℃/分钟的速度从室温降至-6℃，停5分钟后植冰，再停留10分钟，以0.3℃/分钟的速度降至-36℃，再以0.1℃/分钟的速度降至-38℃，直接投入液氮，长期保存。
（7）冷冻胚胎的解冻
①解冻液的配制 根据上文所述配制出10%、6%和3%甘油的蔗糖解冻液，用0.22微米过滤器灭菌，分装在小培养皿内，第1～4杯分别为10%、6%、3%、0%甘油的蔗糖解冻液，第5杯为PBS保存液。
②胚胎的解冻 胚胎从液氮中取出，在3秒钟内投入38℃水浴，浸10秒钟。
③三步脱甘油 用70%酒精棉球擦拭塑料细管和剪刀刃，剪去棉塞端，与带有空气的1毫升注射器连接。再剪去细管的另一端，在室温下将胚胎推入10%甘油和0.3摩尔蔗糖的PBS解冻液中，放置5分钟后依次移入6%、3%和0%甘油的蔗糖PBS解冻液中，各停留5分钟，最后移至PBS保存液中镜检待用。
热心网友
胚胎冷冻在零下196℃的液氮环境下，代谢是完全停止的，因此，理论上胚胎可以永久保存。现在的玻璃化快速冷冻技术十分成熟，冷冻胚胎可以使其得到长时间的保存，目的是为了在以后的治疗周期中不再诱发排卵，仅通过移植复苏胚胎获得妊娠，既节约费用，又在最大限度上利用胚胎。 也是在身体状况良好的情况下为未来保存健康的胚胎。
