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ao/pi双色荧光染色的细胞还能正常生长吗

发布网友 发布时间:2022-04-22 04:39

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热心网友 时间:2024-08-19 06:01

很荣幸能为你解答!
实验、叶绿体的分离与荧光观察

实 验 目 的

1 通过植物细胞叶绿体的分离, 了解细胞器分离的一般原理和方法。

2 观察叶绿体的自发荧光和次生荧光, 并熟悉荧光显微镜的使用方法。

实 验 原 理

将组织匀浆后悬浮在等渗介质中进行差速离心,是分离细胞器的常用方法。叶绿体的分离应在等渗溶液(035molL氯化钠或04molL蔗糖溶液)中进行, 以免渗透压的改变使叶绿体到损伤。将匀浆液1000rmin的条件下离心2min, 以去除其中的组织残渣和未被破碎的完整细胞。然后,在3000rmin的条件下离心5min,即可获得沉淀的叶绿体(混有部分细胞核)。分离过程最好在0~5℃的条件下进行;如果在室温下,要迅速分离和观察。

利用荧光显微镜对可发荧光的物质进行检测时,将受到许多因素的影响,如温度、光、淬灭剂等。因此在荧光观察时应抓紧时间, 有必要时立即拍照。另外,在制作荧光显微标本时最好使用无荧光载片、盖片和无荧光油。

实 验 用 品

一、器材

1主要设备: 普通离心机、组织捣碎机、粗天平、荧光显微镜。

2小型器材: 500ml烧杯2个, 250ml量筒1个, 滴管20支, 10ml刻度离心管20支, 试管架5个,纱布若干,无荧光载片和盖片各4片。

二、材料 新鲜菠菜。

三、试剂 035molL氯化钠溶液,001%吖啶橙(acridine orange)。

实 验 方 法

一、叶绿体的分离与观察

1 选取新鲜的嫩菠菜叶,洗净擦干后去除叶梗脉,称30g于150ml 035molL NaCl溶液中,装入组织捣碎机。

2 利用组织捣碎机低速(5000rmin)匀桨3~5min。

3 将匀浆用6层纱布过滤于500ml烧杯中。

4 取滤液4ml在1000rmin下离心2min。弃去沉淀。

5 将上清液在3000rmin下离心5min。弃去上清液,沉淀即不叶绿体(混有部分细胞核)。

6 将沉淀用035molLNaCl溶液悬浮、

7 取叶绿体悬液一滴滴于载玻片上,加盖玻片后即可在普通光镜和荧光显微镜下观察。

(1)在普通光镜下观察。

(2)在荧光显微镜下观察叶绿体的直接荧光。

(3)在荧光显微镜下观察叶绿体的间接荧光:取叶绿体悬液一滴滴在无荧光载片上,再滴加一滴001%吖啶橙荧光染料, 加盖片后即可在荧光显微镜下观察。

二、菠菜叶手切片观察

用剔须刀片将新鲜的嫩菠菜叶切削出一斜面置于载玻片上,滴加1~2滴035molL NaCl溶液,加盖片后轻压,置显微镜下观察。

(1)在普通光镜下观察。

(2)在荧光显微镜下观察其直接荧光。

(3) 观察间接荧光:向手切片上滴加1~2滴001%吖啶橙染液,染色1min,洗去余液, 加盖片后可在荧光显微镜下观察间接荧光。

实 验 结 果

一、叶绿体的分离和观察

1 普通光镜下,可看到叶绿体为绿色橄榄形,在高倍镜下可看到叶绿体内部含有较深的绿色小颗粒,即基粒。

2 以Olympus荧光显微镜为例,在先用B(bule)激发滤片、B双色镜和O530(orange)阴断滤片的条件下,叶绿体发出火红色荧光。

3 加入吖啶橙染色后,叶绿体可发出桔红色荧光,而其中混有的细胞核则发绿色荧光。

二、菠菜叶手切片观察

1 在普通光镜下可以看到三种细胞 (1)表皮细胞: 为边缘呈锯齿形的鳞片状细胞; (2)保卫细胞: 为构成气孔的成对存在的肾形细胞;(3)叶肉细胞: 为排列成栅状的长形和椭圆形细胞。叶绿体呈绿色橄榄形,在高倍镜下还可以看到绿色的基粒。

2 在荧光显微镜下,叶绿体发出火红色荧光,但其荧光强度要比游离叶绿体弱, 气孔发绿色荧光,两保卫细胞内的火红色叶绿体则环绕气孔排列成一圈。表皮细胞内的叶绿体数量要比叶肉细胞少。

3 用吖啶橙染色后,叶绿体则发出桔红色荧光,细胞核可发出绿色荧光, 气孔仍为绿色。

作 业

1 在普通光学显微镜下,用目微尺和台微尺测量一下叶绿体的长轴和短轴,分别测量5~10个叶绿体,求其平均值。

2 在荧光显微镜下,观察叶绿体的自发荧光时,更换滤镜系统,叶绿体的颜色是否有变化?

实验五、 植物染色体标本制备与观察

实验目的

学习植物染色体标本的制备技术,了解Feulgen反应的基本原理,学习其操作方法和压片法,初步掌握细胞各期的主要特点

核酸是生物最重要的组成成分,核酸分为两大类,即脱氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)它们在细胞内的分布及化学性

热心网友 时间:2024-08-19 06:03

很荣幸能为你解答!
实验、叶绿体的分离与荧光观察

实 验 目 的

1 通过植物细胞叶绿体的分离, 了解细胞器分离的一般原理和方法。

2 观察叶绿体的自发荧光和次生荧光, 并熟悉荧光显微镜的使用方法。

实 验 原 理

将组织匀浆后悬浮在等渗介质中进行差速离心,是分离细胞器的常用方法。叶绿体的分离应在等渗溶液(035molL氯化钠或04molL蔗糖溶液)中进行, 以免渗透压的改变使叶绿体到损伤。将匀浆液1000rmin的条件下离心2min, 以去除其中的组织残渣和未被破碎的完整细胞。然后,在3000rmin的条件下离心5min,即可获得沉淀的叶绿体(混有部分细胞核)。分离过程最好在0~5℃的条件下进行;如果在室温下,要迅速分离和观察。

利用荧光显微镜对可发荧光的物质进行检测时,将受到许多因素的影响,如温度、光、淬灭剂等。因此在荧光观察时应抓紧时间, 有必要时立即拍照。另外,在制作荧光显微标本时最好使用无荧光载片、盖片和无荧光油。

实 验 用 品

一、器材

1主要设备: 普通离心机、组织捣碎机、粗天平、荧光显微镜。

2小型器材: 500ml烧杯2个, 250ml量筒1个, 滴管20支, 10ml刻度离心管20支, 试管架5个,纱布若干,无荧光载片和盖片各4片。

二、材料 新鲜菠菜。

三、试剂 035molL氯化钠溶液,001%吖啶橙(acridine orange)。

实 验 方 法

一、叶绿体的分离与观察

1 选取新鲜的嫩菠菜叶,洗净擦干后去除叶梗脉,称30g于150ml 035molL NaCl溶液中,装入组织捣碎机。

2 利用组织捣碎机低速(5000rmin)匀桨3~5min。

3 将匀浆用6层纱布过滤于500ml烧杯中。

4 取滤液4ml在1000rmin下离心2min。弃去沉淀。

5 将上清液在3000rmin下离心5min。弃去上清液,沉淀即不叶绿体(混有部分细胞核)。

6 将沉淀用035molLNaCl溶液悬浮、

7 取叶绿体悬液一滴滴于载玻片上,加盖玻片后即可在普通光镜和荧光显微镜下观察。

(1)在普通光镜下观察。

(2)在荧光显微镜下观察叶绿体的直接荧光。

(3)在荧光显微镜下观察叶绿体的间接荧光:取叶绿体悬液一滴滴在无荧光载片上,再滴加一滴001%吖啶橙荧光染料, 加盖片后即可在荧光显微镜下观察。

二、菠菜叶手切片观察

用剔须刀片将新鲜的嫩菠菜叶切削出一斜面置于载玻片上,滴加1~2滴035molL NaCl溶液,加盖片后轻压,置显微镜下观察。

(1)在普通光镜下观察。

(2)在荧光显微镜下观察其直接荧光。

(3) 观察间接荧光:向手切片上滴加1~2滴001%吖啶橙染液,染色1min,洗去余液, 加盖片后可在荧光显微镜下观察间接荧光。

实 验 结 果

一、叶绿体的分离和观察

1 普通光镜下,可看到叶绿体为绿色橄榄形,在高倍镜下可看到叶绿体内部含有较深的绿色小颗粒,即基粒。

2 以Olympus荧光显微镜为例,在先用B(bule)激发滤片、B双色镜和O530(orange)阴断滤片的条件下,叶绿体发出火红色荧光。

3 加入吖啶橙染色后,叶绿体可发出桔红色荧光,而其中混有的细胞核则发绿色荧光。

二、菠菜叶手切片观察

1 在普通光镜下可以看到三种细胞 (1)表皮细胞: 为边缘呈锯齿形的鳞片状细胞; (2)保卫细胞: 为构成气孔的成对存在的肾形细胞;(3)叶肉细胞: 为排列成栅状的长形和椭圆形细胞。叶绿体呈绿色橄榄形,在高倍镜下还可以看到绿色的基粒。

2 在荧光显微镜下,叶绿体发出火红色荧光,但其荧光强度要比游离叶绿体弱, 气孔发绿色荧光,两保卫细胞内的火红色叶绿体则环绕气孔排列成一圈。表皮细胞内的叶绿体数量要比叶肉细胞少。

3 用吖啶橙染色后,叶绿体则发出桔红色荧光,细胞核可发出绿色荧光, 气孔仍为绿色。

作 业

1 在普通光学显微镜下,用目微尺和台微尺测量一下叶绿体的长轴和短轴,分别测量5~10个叶绿体,求其平均值。

2 在荧光显微镜下,观察叶绿体的自发荧光时,更换滤镜系统,叶绿体的颜色是否有变化?

实验五、 植物染色体标本制备与观察

实验目的

学习植物染色体标本的制备技术,了解Feulgen反应的基本原理,学习其操作方法和压片法,初步掌握细胞各期的主要特点

核酸是生物最重要的组成成分,核酸分为两大类,即脱氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)它们在细胞内的分布及化学性

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